استخراج DNA از نمونه هاي خشك شده گياه و قارچ با روشي سريع، ايمن و بدون استفاده از نيتروژن مايع

DNA Extraction from dried specimens of plant and fungi in a fast, secure and non-use liquid nitrogen method

استفاده از تكنيك هاي مختلف مولكولي جهت اصلاح گياهان و قارچ ها نيازمند استخراجDNA با كيفيت بالا است. در اغلب روش هاي جداسازي DNAي گياهي و قارچي، تكنيك هاي معمولي كه مورد استفاده قرار مي گيرند شامل استفاده از CTAB، آنزيم ها (مثل پروتئيناز K)، حلال هاي آلي سمي (مثل فنل)، نيتروژن مايع، SDS و يا استفاده از كيت هاي استخراج DNA مي باشد كه هر كدام مزايا و معايب خاص خود را دارند. در اغلب روش هاي استخراج DNA لازم است جهت تهيه پودر مواد گياهي يا قارچي از نيتروژن مايع استفاده شود. توصيه بر اين است كه از نيتروژن مايع در فضاهاي بسته استفاده نشود زيرا تبخير آن باعث افزايش درصد نيتروژن هوا و در نتيجه كاهش اكسيژن خواهد شد كه مي تواند موجب سردرد، بيهوشي و يا حتي مرگ گردد. تماس با نيتروژن مايع موجب سوختگي شديدي نيز مي شود كه مي تواند موجب از كار افتادن اعضاء و يا حتي مرگ شود. از طرف ديگر نمونه قارچ و يا گياه بايد در جعبه يخ به آزمايشگاه منتقل گردد كه اينكار نيازمند تجهيزات انتقال نمونه و يخچال فريزر با دماي 40- درجه سانتي گراد مي باشد. در اين تحقيق، پس از جمع آوري نمونه هاي برگ گندم و قارچ Rhizoctonia solani، ابتدا آنها را در پاكت هاي كاغذي سر باز، در دماي 25 تا 30 درجه سانتي گراد درون آون قرار داده و خشك كرديم. سپس دو نوع بافر استخراج تهيه و استخراج ماده وراثتي طبق دستورالعمل ارائه شده انجام شد و كميت و كيفيت آن به ترتيب با استفاده از دستگاه اسپكتروفتومتري و با استفاده از آغازگرهايISSR و واكنش زنجيره اي پليمراز بررسي گرديد. روش ارائه شده در اين پژوهش يك روش سريع، ايمن، اقتصادي و ساده مي باشد. اين دستورالعمل براي جداسازي DNA از برگ گياهان گونه غلات و گونه هاي قارچي مشابه ريزوكتونيا بسيار كاربردي مي باشد. نتايج بدست آمده حاكي از كيفيت و كميت بالاي DNAي استخراج شده و تكثير بسيار خوب آن بود.

The use of various molecular techniques to improve plants and fungi requires high quality DNA extraction. In most plant and fungal DNA isolation methods, common techniques that are used include the use of CTAB, enzymes (such as proteinase K), toxic solvents (such as phenol), liquid nitrogen, SDS, or the use of DNA extraction kits each have their own advantages and disadvantages. In most DNA extraction procedures, it is necessary to use liquid nitrogen to make powdered plant or fungi material. It is recommended that no liquid nitrogen be used in closed spaces because its evaporation causes an increase in nitrogen levels in the air, resulting in a decrease in oxygen that can cause headaches, anesthesia or even death. Contact with liquid nitrogen causes severe burns, which can lead to death of organs or even death. On the other hand, the sample of the fungus or plant should be transferred to the laboratory in an ice box, which requires a sample transfer equipment and refrigerator at -40 ° C. In this research, after collecting leave of wheat and Rhizoctonia solani samples, we first put them in unopened paper bags at a temperature of 25 to 30 ° C in the oven and dried. Two type extraction buffers were prepared and extraction of heredity materials from the samples was done according to the instructions provided and its quantity and quality was evaluated using spectrophotometric apparatus and using ISSR primers by polymerase chain reaction, respectively. The method presented in this study is a fast, secure, economic and simple approach. This instruction is very useful for isolating DNA from leaves of species of cereals and fungal species similar to rhizoctonia. The results showed that the quality and quantity of extracted DNA was high and its multiplication was very well.