مشكلات احتمالي استخراج استئوبلاست‌هاي دهاني جدا شده از پريوست و استخوان آلوئول در سگ

Probable Limitations of Osteoblasts Isolation from the Periosteum and Alveolar Bone in a Dog Model

زمينه و هدف: ضايعات استخوان فكي، مشكلات زيادي را در جراحي‌هاي فك و صورت ايجاد كرده است. براي غلبه بر مشكلات پيوند استخوان خودي، مهندسي بافت از سلول‌هاي فرد همراه با داربستهاي صناعي استفاده مي‌كند. هدف اين مطالعه بررسي مشكلات احتمالي استخراج استئوبلاستها از پريوست فكي و استخوان آلوئول و مقايسه كمي آن در صورت استخراج بود. مواد و روش‌ها: قطعات استخوان و پريوست از 4 سگ ابتدا از ناحيه استخوان بين دنداني و رترومولر تهيه شدند كه به دليل عدم رشد سلولي در نمونه‌گيري مجدد استخوان از ريج بي‌دنداني و پريوست از استخوان باكال فك پايين تهيه شد. به علت عدم استخراج سلول در مرحله بعد از ناحيه باكالي دندانهاي پرمولر فك بالا نمونه‌ها جدا شده و در محيط كشت اختصاصي قرار گرفتند. با اين روش نمونه‌برداري پس از دو هفته كه سلول‌هاي پريوست تقريباً 80 درصد كف پليت را پر كردند پاساژ داده شدند. نتايج: با وجود رشد خوب سلول‌هاي نمونه پريوست هر 4 سگ در P0 با گذشت 1 هفته از پاساژ اول رشد سلول‌ها متوقف و سلول‌ها به مرور دچار پيري شدند. نتيجه‌گيري: مشكل اساسي در رابطه با كشت سلولي، پير شدن يا de-differentiation آنهاست كه در نتيجه آن سلول‌ها توانايي خود را براي تكثير از دست مي-دهند. از عوامل احتمالي عدم موفقيت در كشت سلولي، آسيب حرارتي سلول‌ها، آلودگي محيط كشت با سلول‌هاي فيبروبلاست، عدم هماهنگي محتويات محيط كشت با نيازهاي تغذيه‌اي سلول، آسيب ناشي از آنزيم‌هاي مورد استفاده جهت پاساژ سلول‌ها و سن بالاي دهنده‌ها را مي‌توان عنوان كرد.

Background & Objective: Bone defects in jaws create major problems for oral and maxillofacial surgery. To overcome the limitations of Autografts tissue engineering uses autogenus cells and synthetic scaffolds. Type of cells or cell sources have an important effect on the construction which is produced. The aim of this study was to evaluate the feasibility and probable limitations of osteoblast isolation from the periosteum and alveolar bone in an animal model and to compare their probable results quantitatively. Materials & Methods: Bone and periosteal samples were harvested from interdental septum and retromolar area of 4 dogs. Because no cell was grown new samples were harvested from edentulous ridge and buccal mandibular periosteum. Since no cell was isolated in next step samples were harvested from buccal area of maxillary premolars and explants in cell culture medium. After 2 weeks adherent cells reaching 80% confluent cells were counted and passaged in cell culture flasks. Results: Despite first good proliferation of periosteal cells of all dogs in P0, their growth was stopped and they become senescence after one week. Conclusion: The key problems in culture techniques are cell senescence and de-differentiation leading to lose the ability of proliferation. It seems there are probable reasons for isolating of osteoblasts including thermal damage of cells, contamination of culture with fibroblasts, inconsistency of medium and cell requirements, enzymatic damage from enzymes used for cell passage and high donor ages.