كلون سازي و بررسي بيان ژن ureB هليكو باكتر پيلوري با استفاده از وكتور بياني pcDNA3.1(+)

Cloning and evaluation of expression of the Original Article Helicobacter pylori ureB gene by using pcDNA3.1(+) expression vector

هليكوباكتر پيلوري عامل بيماري هايي مانند گاستريت، زخم هاي گوارشي و سرطان غدد لنفاوي و دستگاه گوارشي است. هنوز واكسن موثري عليه هليكوباكتر پيلوري توليد نشده است. آنزيم اوره آز يكي از عوامل مهم تحريك سيستم ايمني ميزبان است. بنابراين هدف اين تحقيق كلون سازي و بررسي بيان ژن ureB به عنوان كانديداي واكسن ژني عليه هليكوباكتر پيلوري مي باشد. روش كار: در اين بررسي تجربي، ژن كد كننده ي ureB از ژنوم هليكوباكتر پيلوري به روش PCR جدا شد. محصولات PCR به روش كلون سازي T/A در وكتور pTZ درج شدند و سپس با آنزيم هاي XhoI و XbaI بريده شده و وارد وكتور بياني pcDNA3.1(+) گرديدند. وكتور نهايي pcDNA3.1(+)-ureB به روش الكتروپوريشن در سلول هاي CHO ترانسفرم شد. براي بررسي بيان پروتئين از روش SDS-PAGE استفاده شد. يافته ها: نتايج نشان دهنده تشكيل وكتور نوتركيب pTZ-ureB مي باشد. هضم آنزيمي و تعيين توالي نيز صحت كلونينگ ژن ureB در وكتور pcDNA3.1(+) را تاييد كرد. نتايج الكتروپوريشن و سپس بررسي بيان ژن كلون شده در سلول هاي جانوري، تشكيل باند پروتئيني مورد نظر را روي ژل SDS-PAGE نشان داد. نتيجه گيري: بر پايه نتايج حاصل، ژن ureB كلون شده در وكتور بياني pcDNA3.1(+)، توان بيان و توليد محصول پروتئيني اختصاصي اين ژن در سلول­هاي يوكاريوتي را دارد. لذا سازواره نهايي pcDNA3.1(+)-ureB از پتانسيل لازم براي بررسي ايمني ­زايي در مدل حيواني به عنوان واكسن ژني برخوردار است.

Introduction: Helicobacter pylori causes the gastritis, peptic ulcer, gastric cancer and lymphoma. There is no effective vaccine against this bacterium. Urease which is coded by ureB is one of the important stimulating agents for host immune system. The aim of this study was cloning and expression study of the ureB gene in order to create a gene vaccine against H. pylori. Methods: In this experimental study, ureB gene was reproduced from Helicobacter pylori genome using PCR method. The PCR products were T/A cloned into pTZ vector and then digested with XhoI and XbaI enzymes and inserted to the pcDNA3.1(+) vector. pcDNA3.1(+)-ureB final construct was transformed in CHO cells using electroporation method. ureB gene expression was shown on a SDSPAGE gel. Results: The results show that the pTZ-ureB recombinant vector was generated. The restriction digest and sequencing confirmed the correctness of the cloning of ureB into pcDNA 3.1(+) vector. The electroporation results and study of gene expression in animal cells showed the desirable protein band on SDS-PAGE gel. Conclusion: According to the results, the pcDNA3.1(+)-ureB expression vector can express the ureB gene product in eukaryotic cells. So the pcDNA3.1(+)-ureB final construct has a high potential as a DNA vaccine candidate for the evaluation of the immunogenicity in animal model.