جداسازي مولكولي و همسانه سازي ژن انتقالي پس زننده (Efflux) كاست ژنومي (ABC) از تريكوفايتون روبروم

Molecular Separation and Cloning of the ATP-binding Cassette (ABC) from Trichophyton Rubrum

زمينه و هدف: خانواده ABC ترانسپورترها در قارچ ها علاوه بر ايفاي نقش در تقسيم سلولي و نگهداري حجم سلول در خروج متابوليت هاي طبيعي و مقاومت دارويي، نيز نقش مهمي دارد. هدف از انجام اين تحقيق جداسازي مولكولي و همسانه سازي ژن انتقالي پس زننده (Efflux) كاست ژنومي (ABC) تريكوفايتون روبروم خواهد بود. روش بررسي: در اين مطالعه 60 نمونه درماتوفيتوزيس از بيماران جداسازي و با روشهاي ميكروسكوپي ، شيميايي و مولكولي تاييد گرديدند. پس از تاييد تريكوفيتون در مرحله بعدي آزمون PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي مربوط به كاست ژني ABC صورت گرفت. قطعه ژني ABC در وكتور PTG19 كلون و تاييد گرديد. بيان كاست ژنوميABC با روش Real-Time PCR سنجيده شد. يافته ها : از 60 نمونه جداسازي شده در مجموع 12 ايزوله تريكوفيتون روبروم جداسازي شد. از 12سويه تريكوفايتون جدا شده، 6 سويه حامل ژن ABC بودند.توسط آزمون PCR Colony حضور ژن مورد نظر تاييد و در نهايت بيان و تكثير ژن ABC كلون شده در باكتري اشريشياكلي از طريق Real time PCR تاييد شد. نتيجه گيري: يكي از پايدار ترين راه هاي مقاومت به آنتي بيوتيك ها در ميكروارگانيسم بيان افلوكس پمپ ها مي باشد. در اين راستا محققان تركيبات مهاركننده افلوكس پمپ ها را توليد كردند و از تركيب آن ها با آنتي بيوتيك ها در درمان عفونت ها استفاده مي كنند؛ اما به دليل سميت اكثر اين تركيبات در انسان استفاده گسترده از آن ها ممنوع مي باشد از اين رو چالش جديد،يافتن تركيبات مهاركننده جديد با سميت كمتر است .

Background and Objectives: The ABC family of transporters, in addition to their role in cell division and storage of cell volume in fungi, are reported to play a role in natural metabolism and drug resistance. The purpose of this study was to investigate the molecular separation and cloning of the ATP-binding Cassette (ABC) from Trichophyton rubrum. Materials and Methods: Sixty samples of dermatophytosis were isolated from patients. Isolates were identified by chemical and molecular tests. Afterward, PCR was performed using specific primers for the ABC gene. PCR product was cloned in the PTG19 vector. Real-Time PCR was performed to evaluate the expression level of ABC gene. Results: A total of 12 isolates of Trichophyton Rubrum were identified. Six isolates were positive for ABC gene. The expression of the ABC gene cloned in E. coli XL1blue was confirmed by Real time PCR. Conclusion: One of the most stable ways of resistance to antibiotics in microorganisms is the expression of efflux pumps. In this regard, researchers have developed compounds that inhibit the influx of pumps and use their combination with antibiotics to treat infections; However, due to the toxicity of most of these compounds in humans, their widespread use is prohibited, so the new challenge is to find new inhibitory compounds with less toxicity.