بررسي اثر دگزامتازون روي تغييرات بيان رونوشت ژن هاي Fas/FasL و Bax/Bcl2 در رده سلولي HT-29 سرطان كولوركتال انساني

Effect of Dexamethasone on Fas/FasL and Bax/Bcl2 mRNA Expression in Human Colorectal Cancer HT-29 Cell Line

سرطان كولوركتال يكي از شاي عترين سرطان ها و عامل مرگ بر اثر سرطان در جهان است. دگزامتازون، يك داروي گلوكوكورتيكوييدي و داراي خواص ضد تكثيري و ضد التهابي است كه قادر به مهار رشد و القا آپوپتوز در رده هاي سلولي سرطان ميلوما انساني است. هدف از اين تحقيق تعيين اثر اين دارو روي رده سلولي HT-29 سرطان كولوركتال انساني با تكيه بر روي بيان ژن هاي مسير خارجي آپوپتوزي Fas و FasL و بيان ژن هاي مسير داخلي آپوپتوزي Bax و Bcl-2 است. مواد و روش ها تحقيق به روش تجربي انجام شد. پس از كشت رده سلولي HT-29 ، سلول ها تحت تيمار با غلظت هاي مختلف دگزامتازون) 1/ 0 ميكرومول الي 1000 ميكرومول (و زمان هاي مختلف) 24 ، 48 و 72 ساعت قرار گرفتند. بررسي سميت با تست MTT ارزيابي و IC50 تعيين شد. براي بررسي كمي تغيير بيان رونوشت ژ نهاي Fas/FasL و RNA ،Bax/Bcl-2 ، از سلول هاي تيمار شده و تيمار نشده استخراج شد و پس از سنتز cDNA ، بيان رونوشت ژن ها توسط quantitative Real time-PCR ارزيابي و آناليز داده ها با استفاده از روش ليواك سنجيده شد. يافته ها دگزامتازون در غلظت 1000 ميكرومول به كاهش سلول هاي زنده در هر سه بازه زماني 24 ، 48 و 72 ساعت منجرشده است، اما اين غلظت بعد از 48 ساعت انكوباسيون به عنوان IC50 تعيين شد. پس از تيمار سلول ها در غلظت IC50 ، سطح بيان رونوشت ژنهاي Fas و FasL در مقايسه با سلول هاي تيمار نشده تغيير معنا دار مشاهده نشد (p <0.05). در حالي كه سطح بيان رونوشت ژ نهاي Bax و Bcl-2 به طور معنا دار در مقايسه با سلول هاي تيمار نشده به ترتيب افزايش و كاهش يافت (p <0.05). دگزامتازون به روش وابسته به دوز و زمان روي رده سلولي HT-29 سرطان كولوركتال انساني اعمال اثر كرده است. نتيجه گيري دگزامتازون مي تواند سبب مهار رشد در رده سلولي HT-29 سرطان كولوركتال انساني و همچنين به القا آپوپتوز از طريق مسير داخلي منجر شود، درحالي كه تاثيري روي القا آپوپتوز از طريق مسير خارجي ندارد. بنابراين تيمار رده سلولي HT-29 سرطان كولوركتال انساني با غلظت معيني از دگزامتازون ميتواند بيان ژن هاي دخيل در مسير داخلي آپوپتوز را در راستاي مرگ برنامه ريزي سلول تغيير دهد.

Colorectal cancer is one of the most common cancers and among the most common causes of cancer death worldwide. Dexamethasone is a glucocorticoid medication which has anti-proliferative and anti-inflammatory properties that induce apoptosis and growth inhibition in human myeloma cell lines in vitro. The aim of the current study was to determine the effects of dexamethasone against human colorectal cancer HT29- cell lines, relying on the expression of genes which are involved in extrinsic (Fas and Fasl) and intrinsic pathway of apoptosis (Bax and Bcl2). Materials and methods: An experimental study was conducted. HT-29 cell line was cultured and then treated with various concentrations of dexamethasone (from 0.1 to 1000 μM) for 24h, 48h, and 72h incubation. The cytotoxicity was measured using MTT assay and IC50 was determined. Then, RNA was extracted from treated and untreated cells and cDNA was synthesized. Gene expression was investigated using qReal-Time PCR method. Data analysis was performed using the livak method. Results: Dexamethasone at 1000μM significantly inhibited the growth of treated HT-29 cells after 24h, 48h, and 72h incubation and IC50 was 1000μM after 48h. After treating cells at IC50 concentration, the mRNA expression of Fas and FasL did not change significantly in comparison with untreated cells (p <0.05), while Bax and Bcl2- mRNA expression increased and decreased respectively in comparison with untreated cells (p <0.05). Dexamethasone was effective against human colorectal cancer HT-29 cell line in a dose dependent manner and induced the intrinsic genes of apoptosis. Conclusion: Dexamethasone can inhibit the growth of human colon cancer HT-29 cell lines and induces apoptosis through the intrinsic pathway of apoptosis, while it has no effect on the extrinsic pathway of apoptosis.