كليدواژه :
وقوع سوختگي , جوانه , سرشاخه , درختان گلابي
چكيده فارسي :
طي بازديدهاي انجام شده طي نيمه پاياني زمستان 1397 تا ابتداي بهار 1398 از باغات گلابي در استان مازندران، نشانه هايي مشابه سوختگي در سرشاخه ها و جوانه هاي جانبي مشاهده شد. به منظور بررسي و شناسايي عامل بيماري، نمونه هاي داراي علائم به آزمايشگاه منتقل گرديد و پس از ضدعفوني سطحي توسط الكل اتانول 70% و محلول هيپوكلريت سديم 0/5 درصد در تشتكهاي پتري حاوي محيط كشت آب آگار (WA) و سيبزميني دكستروز آگار (PDA) همراه با 1/5 درصد آنتيبيوتيك تتراسايكلين و استرپتومايسين كشت داده شد و در دماي 25 درجه سلسيوس نگهداري گرديد. پرگنه قارچ، ابتدا به رنگ كرم تا قهوهاي روشن و سپس به رنگ سبز تيره تغيير رنگ يافت و پس از پنج روز پيكنيديومهاي قارچ در محيط كشت ظاهر شدند. در نهايت خالص سازي جدايه هاي قارچي به روش نوك ريسه و تك اسپـور انجام و جدايه هاي خالص درتشتكهاي حاوي محيط كشت PDA كشت داده شد. پيكنيدها تيره رنگ و تقريباً صاف با گردن نسبتاً بلند بوده و كنيديهاي آن اغلب تك سلولي و تقريباً تخم مرغي شكل تا بيضوي و شفاف اما در توده اسپور تيره رنگ بودند. كلاميدوسپورهاي آن نامنظم و در زنجيره هاي منشعب و غيرمنشعب به صورت مياني و انتهايي تشكيل شدند. بر اساس خصوصيات ماكروسكوپي و ميكروسكوپي قارچ در محيط كشت و طبق توصيف ارائه شده توسط منابع معتبر علمي (Boerema et al., 2004)، گونه Phoma glomerata شناسايي شد. آزمون‌هاي بيماري‌زايي بر روي ده نهال سالم يك ساله و شاخه هاي فاقد بيماري انجام شد. سوسپانسيون حاوي اسپورهاي ثانوي با غلظت (106 × 1 اسپور در ميكروليتر) روي آنها پاشيده شد. گياهان شاهد تنها با آب مقطر سترون آغشته شدند و پس از قرار دادن در محفظه پلاستيكي در دو دامنه دمايي 2 ±15 و 2± 23 درجه سلسيوس و رطوبت نسبي 90%، در گلخانه نگهداري شدند. پس از ده روز علايم بيماري شامل لكه هاي زرد با حاشيه سوخته مشاهده شد كه با علايم ارائه شده در منابع (Chuan and Chand, 1980) مطابقت داشت. گياهان شاهد فاقد علائم مزبور بودند. به منظور تهيه توده ميسليومي جهت استخراج DNA ژنومي، از محيط غذايي PDB (Potato dextrose broth) استفاده شد. استخراج DNA به روش CTAB انجام گرديد (Doyle and Doyle, 1987؛ اميردهي و همكاران، 1396). نواحي ژنومي ITS1-5.8S-ITS2 تكثير و تعيين توالي شدند. جهت تكثير اين نواحي از تركيب آغازگر ITS1 با توالي('-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'5) به عنوان آغازگر مستقيم و آغازگر ITS4 به عنوان آغازگر معكوس با توالي ('-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'5) استفاده شد (White and Morgan, 1987؛ White et al., 1990). مخلوط واكنش PCR با حجم نهايي 25 ميكروليتر شامل 6/5 ميكرولـيتر آب ديونـيزه استريل، 13/5 ميـكروليتر 2X PCR Master Mix ، 5/0 ميكروليتر از هـر آغازگر به غلـظت نهـايي 10 پيكـومول و 4 ميكروليتر DNA طـي واكنش زنجيره‌اي پليمراز شامل واسرشت سازي اوليه در دماي 94 درجه سلسيوس به مدت دو دقيقه و سپس 38 چرخه تحت شرايط واسرشت سازي در 94درجه سلسيوس به مدت 30ثانيه، اتصال در دماي 50درجه سلسيوس 30ثانيه، گسترش در
دماي 72 درجه سلسيوس 30 ثانيه و گسترش نهايي در دماي 72درجه سلسيوس به مدت 10دقيقه در دستگاه
ترمـوسايكـلر قرار گرفـت.
چكيده لاتين :
Due to the observation of a disease symptoms resembling fire blight in pear orchards of Mazandaran province, sampling of the symptoms of blight of buds took place through winter 2018-spring 2019. Samples from infected bud and blighted twigs were cut into 2- to 3-mm pieces, surface of the leaves was sterilized by 75% ethanol for 10 s followed by drowning 3 min in 0.5% sodium hypochlorite, rinsed three times with sterile distilled water, and cultured on water agar (WA) and potato dextrose agar (PDA) with 1.5% streptomycin and tetracycline. Petri dishes were incubated at 25°C. The cultures were initially pale brown and turned dark green with age. Embedded pycnidia were generally formed after 5 days. The pycnidia were agglutinating, globose to subglobose. Hyphal tip from the growing edge of colonies cultured for 3 days at 25°C was transferred to PDA to obtain pure cultures. The colonies were whitish initially and then became olive green to dark brown. Conidia were long, ellipsoid, single-celled, and hyaline or slightly pigmented. The fungus was identified as Phoma glomerata morphologicaly (Boerema et al., 2004). Koch's postulates was done for pathogenicity test. Symptom-free one year old plants and branches were inoculated with spore suspension (1×106 spores/ml). Sterile water was sprayed on another set of plants as non-inoculated control. Each inoculated branch was wrapped in a plastic bag and maintained in a greenhouse at two temperature ranges of 15 ± 2°C and 23± 2°C with 90% rational humidity. After 10 days, symptoms similar to references (Chohan and Chand, 1980) were observed and the same fungus (P. glomerata) was re-isolated. The species of the fungus was confirmed by extraction of genomic DNA from a single spore isolate (Amirdehi et al., 2017 and Doyle and Doyle, 1987). Then, ITS1, 5.8S, ITS2 were amplified with universal primers ITS1 (5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3') and ITS4 (5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3') and maintained at 95°C for 3 min. Thirty eight cycles of PCR were performed by heating at 94°C for 1 min, 55°C for 1 min, and 72°C for 1 min, followed by a final period at 72°C for 10 min (White et al., 1990). The amplicon was sequenced and analyzed using BLAST software, and showed a homology of 99% with a corresponding sequence of Phoma glomerata (Corda) Wollenw & Hochapfel. The fungus was reported by Mathur (1979) on Ficus elastica for the first time from India. The fungus was also reported with symptoms of wilting and burning of the lateral buds of the pear (Pyrus communis) for the first time by Chohan and Chand (1980) from India. In Iran Phoma glomerata was reported from wheat Triticum aestivum L. and cucumber Cucumis sativus L. (Safaee et al., 2000; Hatami et al., 2008), Ficus elastica (Aghapour et al., 2009), Mandarin (Rostami et al., 2011), Rosemary (Moshrefi et al., 2015). Nevertheless, this species has not been observed on P. communis from Iran. This is the first report of bud and twig blight disease of Pear (P. communis) in Iran caused by the fungus Phoma glomerata.
