شناسايي مولكولي و بررسي فيلوژني قورباغه هاي مردابي در جنوب‌ شرق استان تهران با استفاده از توالي ژن srRNA 12 ميتوكندريايي

Molecular identification and study of water Frogs phylogeny in South eastern Tehran province using mitochondrial 12srRNA gene Sequence

تاكنون اغلب قورباغه هاي مردابي آب هاي ايران بر مبناي روش ريخت شناسي مورد شناسايي قرار گرفته اند و تمامي جمعيت قورباغه هاي مردابي با وجود دامنه گسترده توزيع آن ها به يك گونه واحد به نام Rana (Pelophylax) ridibunda نسبت داده شده اند. بنابراين در اين تحقيق شناسايي دقيق تر از قورباغه هاي مردابي شهرستان هاي جنوب شرق استان تهران براساس توالي ژن srRNA12 ميتوكندريايي مورد بررسي ژنتيكي قرار گرفت. براي اين منظور 4 ايستگاه اصلي (پاكدشت، ورامين، قرچك، پيشوا) در جنوب شرق استان تهران انتخاب شد. سپس تعداد 19 عدد نمونه توسط توردستي صيد، به ظروف درب دار حاوي الكل منتقل و سپس جهت بررسي هاي مولكولي به آزمايشگاه منتقل گرديدند. جهت شناسايي مولكولي، استخراج DNA از عضله پا به روش CTAB انجام شد. سپس با استفاده از پرايمر اختصاصي واكنش زنجيره اي پليمراز جهت تكثير توالي ژن srRNA12 ميتوكندريايي انجام شد. درخت فيلوژني تجزيه و تحليل ماتريس داده ها براساس روش هاي (Neighbor-joining) و ماكزيمم احتمال (Maximum Likelihood) با استفاده از نرم افزار Mega6 انجام گرديد. نتايج بررسي هاي فيلوژني نشان داد، دو كلاد اصلي با ضريب حمايت 100 وجود دارد، كه يك زيرشاخه متعلق به نمونه هاي مطالعه حاضر و ديگر گروه مربوط به جمعيت قورباغه هاي P. bedriagae مي باشد. در نتيجه احتمال مي رود جمعيت قورباغه هاي مردابي شرق تهران متعلق به گونه bedriagae P. و يا زير گونه Pelophylax Sp. باشند كه مستلزم بررسي هاي بيش تر با ساير نشانگرهاي مولكولي مي باشد.

Up to now most species of Iranian frogs has been identified morphologically and all populations (albeit their vast distribution) are assigned to Rana (Pelophylax) ridibunda. The main objective of this research was to study frog populations of the South eastern Tehran using mitochondrial 12srRNA sequencing. For this purpose, n=19 water frogs were sampled in four stations (i.e. Pakdasht, Varamin, Gharchak, Pishva). The samples specimens were preserved at 96% ethanol solution and transferred to the laboratory for further analysis. DNA was extracted from leg tissue using CTAB method and the 12srRNA gene was ampilified and sequenced using primers developed by Kocher et al. (1989). The phylogenic tree was drawn using Joining Neighbor and Maximum Likelihood methods in Mega6 software the results indicate that indicated two clads with 100% affinity. The first clade assigned to P. bedriagae populations and the next clade included our samples. In conclusion, the frog populations of Tehran province may be assigned to P. bedriagae or a subspecies. Further research is needed to reveal this.