ارزيابي تشخيص سريع و بررسي حضور ژن‌هاي حدت اپرون‌ spv در جدايه‌هاي سالمونلا با استفاده از روش‌هاي مولكولي simplexPCR و multiplexPCR

Evaluation of rapid detection and investigation of the presence of spv operon virulence genes in Salmonella isolates using simplex PCR and multiplex PCR molecular methods

امروزه بـراي شناسـايي و تشخيص سروتيپ­هاي سالمونلا در نمونه­ هاي باليني و مواد غذائي از روش‌هاي سنتي تشخيص اين باكتري استفاده مـي‌گـردد كه وقت­ گير و گاهي مشكل­ ساز مي‌باشند، اما با كشف روش‌هاي سريع تشخيص مولكولي، اين مشكلات تا حد زيادي مرتفع گرديده ­است. مطالعه حاضر، با هدف تشخيص سريع جدايه ­هاي مختلف سالمونلا بر اساس جسجوي ژن كروموزومي invA و نيز شناسائي جدايه­هاي حاد حاوي ژن­هاي حدت اپرون ­­ spv­انجام گرديد. بدين منظور تعداد 20 جدايه انساني سالمونلا از بيمارستان­هاي شهر تبريز و 20 جدايه اين باكتري كه از پنيرهاي سنتي عرضه­شده در بازار مصرف تبريز جدا شده بود، تهيه گرديد. ابتدا با استفاده از پرايمر­هاي اختصاصي ژن­invA ، تائيد مولكولي جدايه­ها با استفاده از روشsimplex PCR ارزيابي گرديد. در ادامه براي بررسي سويه­هاي حاد باكتري مذكور براساس حضور ژن­هاي اپرون ­spv، با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي مربوطه، به روشmultiplex PCR حضور ژن­هاي R، C، B وspvA بررسي شد. يافته ­ها اولاً نشان­ دهنده تائيد مولكولي همه جدايه ها بود. ثانياً همه 40 جدايه مورد آزمايش داراي 3 ژن R، C وspvA بوده ولي هيچ­كدام از آن­ها داراي ژنspv­B نبودند. به نظر مي­رسد كه با توجه به محدوديت­ها و مشكلات موجود در روش بررسي آزمايشگاهي سنتي سالمونلاها، مي­توان ازPCR به عنوان روشي سريع در تشخيص آلودگي به باكتري سالمونلا استفاده كرد. همچنين بايستي وجود 3 ژن از 4 ژن حدت اپرون ­spv در جدايه­ هاي مختلف سالمونلا در منطقه تبريز را يافته­اي نامطلوب تلقي كرد كه لزوم رعايت بيشتر اصول كنترل و پيشگيري در جوامع دامي و انساني را تاكيد مي­كند.

The traditional methods of diagnosing Salmonella which are time-consuming and sometimes problematic, are still used to identify Salmonella serotypes in clinical and food samples, but with the invention of rapid molecular detection methods, these problems have been largely eliminated. The present study aimed to rapidly detect different Salmonella isolates based on invA chromosomal gene search and also to identify acute isolates containing spv operon virulence genes. To this end, 20 human isolates of Salmonella were obtained from hospitals in Tabriz and 20 isolates of this bacterium were isolated from traditional cheese available on Tabriz consumer market. The molecular confirmation of isolates was first evaluated using specific primers of invA gene by simplex PCR method. Then, in order to evaluate the acute strains of the bacterium based on the presence of operon spv, the presence of spvA, B, C and R genes was examined by multiplex PCR using the relevant specific primers. The results showed that firstly, all isolates had molecular confirmation. Secondly, all 40 tested isolates had 3 spvA, C and R genes, but none of them had spvB gene. It seems that due to the limitations and problems in the traditional laboratory examination of Salmonella, PCR can be used as a rapid method to detect Salmonella infection. Also, the presence of 3 out of 4 virulence genes of opron spv in different Salmonella isolates in Tabriz region should be considered an undesirable finding, which emphasizes the need to further observe principles of control and prevention in animal and human communities.