عنوان مقاله :
جداسازي و توالي يابي ژن توليد اسيد فوليك از باسيل هاي خاك و كلونينگ آن در باكتري اشرشيا كلاي
عنوان به زبان ديگر :
Isolation and sequencing of Folic acid production gene from soil bacilli and its cloning in Escherichia coli
پديد آورندگان :
حاج قنبري، كيوان دانشگاه آزاد اسلامي واحد سيرجان - گروه ميكروبيولوژي، سيرجان، ايران , خندان دزفولي، نوشين دانشگاه آزاد اسلامي واحد سيرجان - گروه ميكروبيولوژي، سيرجان، ايران , اميني، كيومرث دانشگاه آزاد اسلامي واحد ساوه - دانشكدۀ علوم پايه - گروه ميكروبيولوژي، ساوه، ايران
كليدواژه :
همسانه‌سازي , باسيلوس , فولات
چكيده فارسي :
مقدمه: فوليك‌اسيد يا ويتامين B9 از مهم‌ترين ويتامين‌هاي ضروري بدن است كه نقش اساسي در انتقال گروه‌هاي يك‌كربنه و بسياري از مسيرهاي بيوشيميايي دارد و كمبود آن موجب بروز بيماري‌هاي عصبي، كم‌خوني و مشكلات رشد در كودكان مي‌شود. هدف مطالعۀ حاضر، جداسازي ژن رمز‌كنندۀ فوليك‌اسيد از باسيل‌هاي خاك، توالي‌يابي آن و همسانه‌سازي اين ژن در باكتري اشريشيا كلي بود تا بتوان گام مؤثري در راستاي توليد صنعتي اين ويتامين از سويه‌هاي بومي برداشت
مواد و روشها: در مطالعۀ حاضر، 40 نمونه از عمق 10 تا 15 سانتي‌متري خاك مناطق مختلف اطراف شهر سيرجان نمونه‌برداري شدند. باكتري‌هاي باسيلوس با استفاده از محيط‌كشت Skim milkجداسازي و با روش‌هاي مولكولي و بيوشيميايي شناسايي شدند. جدايه‌هاي داراي ژن FOLA به كمك روش مولكولي PCR مشخص شدند و ژن تكثيرشده در باكتري E. coliهمسانه‌سازي و توالي‌يابي شد؛ سپس بيان ژن به روش Real-time PCR بررسي و روابط فيلوژنتيكي آن مشخص شد.
نتايج: درنتيجۀ غربال‌گري نمونه‌هاي خاك ارسالي به آزمايشگاه، درمجموع 12 كلني مشكوك به باسيل‌هاي گرم مثبت جداسازي شدند كه بر اساس ويژگي‌هاي ريخت‌شناختي، ميكروسكوپي و آزمون‌‌هاي بيوشيميايي شناسايي شدند و مشخص شد همۀ گونه‌ها ژن FOLA را دارند. همسانه‌سازي FOLA در يكي از گونه‌ها به‌طور موفقيت‌آميز انجام و بيان ژن آن با Real-time PCRتأييد شد.
بحث و نتيجهگيري: در بررسي حاضر، ژن FOLA از باكتري باسيلوس هالوتولرانس جداشده از خاك‌هاي مناطق اطراف شهر سيرجان با موفقيت در وكتور بياني PTG19-T همسانه‌سازي شد و بيان موفقيت‌آميز ژن نشان داد مي‌توان با گسترش اين روش، گامي در راستاي توليد صنعتي فولات برداشت.
چكيده لاتين :
Introduction: Folic acid or vitamin B9 is one of the most essential vitamins, which plays a key role in the transport of carbon and many biochemical pathways and its deficiency can lead to neurological diseases, anemia and developmental problems in children. The present study aimed to take a step towards producing this vitamin from native strains by isolating and sequencing the folic acid production gene from soil isolated bacillus and cloning it in Escherichia coli.
Materials and Methods: In this study, 40 samples were collected from 5-10 cm depth from different areas around Sirjan city. Bacillus bacteria were isolated by molecular and biochemical methods. By PCR method, bacteria with FOLA gene were identified and the amplified gene was cloned into E. coli and sequenced. Gene expression was then evaluated by Real time PCR and its phylogenetic relationships were determined.
Results: As a result of screening of 40 soil samples sent to the laboratory, a total of 12 suspected colonies were isolated from Gram-positive bacilli which were identified based on morphological, microscopic and biochemical characteristics and all species were identified as having FOLA gene. FOLA cloning was performed successfully and confirmed its gene expression.
Conclusion: In the present study, the FOLA gene from Bacillus Halotolerance isolated from the soils of the surrounding areas of Sirjan was successfully cloned into PTG19-T expression vector and its successful expression showed that it could be expanded by this method for industrial production of Folate.
عنوان نشريه :
زيست شناسي ميكروارگانيسم ها
