شناسايي و بررسي مولكولي عامل پوسيدگي پايه سيترنج در باغات مركبات شرق استان مازندران

Pathological and Molecular Identification the causal agent of Cittrange rootstock rot in Citrus Orchards the East of Mazandaran

در سال هاي اخير عارضه اي شبيه به گموز مركبات با علائم پوسيدگي، جداشدن پوست از تنه، قهوه اي شدن پوست و لايه سطحي چوب متصل به آن، زردي و زوال روي پايه سيترنج درختان مركبات در شرق استان مازندران مشاهده گرديد. نمونه هاي مشكوك به آلودگي در مراحل مختلف رشد جمع آوري و به آزمايشگاه منتقل گرديد. پس از شستشوي سطحي نمونه ها با آب جاري و ضدعفوني سطحي با الكل اتيليك 70% ، قطعاتي از هر نمونه با تيغ استريل جدا و در محيط هاي غذايي PARPH و PDA كشت داده شد. روي محيط PARPH پرگنه قارچي رشد نكرد ولي روي PDA جدايه هاي قارچي با پرگنه هاي همگن از نظر شكل ظاهري به دست آمد كه پس از خالص سازي، بيماريزايي جدايه ها با قرار دادن يك قطعه از محيط كشت حاوي ريسه در محل برش داده پوست نهال هاي سيترنج در شرايط گلخانه اي، موجب نكروز در محل مايه كوبي و پيشرفت آلودگي و زردي نهال هاي سيترنج تلقيح شده گرديد. شاهد نهال سيترنج مايه كوبي شده با قطعه اي از محيط كشت PDA سترون تلقيح شده با جدايه هاي قارچي علائم آلودگي را نشان ندادند. جدايه هاي قارچ مورد بررسي در محيط آگار حاوي Foeniculum vulgare توليد پريتس كروي نمود. آسك هاي آن تك جداره، چماقي و بي رنگ بود. فرم غير جنسي آن توليد كنيديوما هايي با استروماي حقيقي، كنيديوفورهاي سيلندري شكل و پيكنيد نمود. بر اساس نتايج به دست آمده، پرگنه هاي مورد بررسي با گونه Diaporthe novem Santosمطابقت داشت. استخراج DNA ژنومي جدايه هاي قارچي انجام و تكثير با آغازگرهاي نواحي ITS1، ITS4 و Bt صورت گرفت و قطعات به دست آمده تعيين توالي گرديد. نتايج حاصل از تعيين توالي نيز گونه قارچي فوق الذكر را تاييد نمود. اين اولين گزارش از بيماري پوسيدگي پايه سيترنج و شناسايي عامل آن در شمال ايران مي باشد.

Recently, a devastating decline has been observed in some citrus groves established with cittrange rootsock. The most conspicuous symptom is a frustose rootstock and decline. The suspicious infected samples were collected at different stages of growth and transported to the laboratory. The samples were rinsed under top water and disinfested with 70% ethyl alcohol. Pieces of each sample was separated with a sterile blade and cultured on potato dextrose agar (PDA) medium. Obtained fungal isolates were purified and pathogenicity of the isolates was tested by A mycelial plug (5 mm diam.) obtained from the margin of a fungal colony was placed in the wound with the mycelium facing towards the stem, and the wound was wrapped with Parafilm. Based on the morphological characteristics including colony form, conidia specific feature, and growing on agar cum Foeniculum vulgare stipes, studied fungal isolates were identified as Diaporthe novem Santos. Genomic DNA extraction was done from fungal isolates and amplification was done with ITS1, ITS4 and Bt regions primers and the amplicons were sequenced. Also the sequencing results confirmed fungal species mentioned above. This is the first report of fruit drop and dieback disease and the causal agent identification on local tangerine in north of Iran.