بررسي و مقايسه روش‌هاي مبتني بر رسوب دهي و كروماتوگرافي تمايلي در تخليص پروتئين نوتركيب استرپتوكيناز

سابقه و هدف: تخليص پروتئين با بازده و خلوص بالا چالشي جدي در تهيه پروتئين هاي نوتركيب دارويي است. از بين استراتژي هاي تخليص پروتئين هدف، روش هاي تخليص بر پايه كروماتوگرافي تمايلي مانند Ni-NTA بسيار پركاربرد و در عين حال هزينه بر هستند. روش هاي تخليص مستقل از ستون، مانند استفاده از پروتئين هاي شبيه به الاستين (ELP)، به عنوان روش هاي جايگزين در حال توسعه هستند. در اين تحقيق، كارايي استفاده از رزين نيكل، ELP و تركيب آنها (ELP/Ni-NTA) در تخليص پروتئين استرپتوكيناز مورد ارزيابي قرار گرفت. روش بررسي: ژن استرپتوكيناز توسط PCR تكثير، در پلازميدpET21 كلون و به سلولE.coli-Rosetta ترانسفرم شد. پروتئين آن بيان و تخليص شد سپس ماهيت و خلوص پروتئين به ترتيب توسط وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزيابي قرار گرفت. بازده خالص سازي در هريك از روش هاي تخليص با ميكروبرادفورد محاسبه شد. يافته ها: بازده خالص سازي ELP-SK-His با استفاده از ستون Ni-NTA به مقدار µg/ml 14±108 و ELP به مقدار µg/ml 16±76 و ELP/Ni-NTA به مقدار µg/ml 11±88 محاسبه شد. نتايج رنگ آميزي و وسترن بلات نشان داد كه كيفيت خلوص پروتئين خالص شده با ELP/Ni-NTA بيشر از روش ELP و Ni-NTA به تنهايي بود. نتيجه گيري: مطالعه حاضر نشان داد كه ادغام روش هاي خالص سازي در يك مرحله مي تواند باعث افزايش خلوص و بازده محصول نهايي در توليد پروتئين هاي نوتركيب دارويي شود.