طراحي و ساخت سازه شبيه ساز جهت تشخيص باكتري بورخولدريا مالئي و سودومالئي

Design and production of a genetically simulant construct for the detection of B. malei and pseudomaleii

باكتري هاي بورخولدريا ماليي و سودوماليي (Burkholderia mallei and pseudomallei species) جزو عوامل بيماري زاي خطرناك انساني محسوب مي شوند. تشخيص برپايه كشت براي اين باكتري، هزينه بر و زمان بر و از طرف ديگر كار با اين باكتري بسيار خطرناك بوده و همچنين امكان دسترسي به اين باكتري و حتي ژنوم آن بسيار مشكل مي باشد. هدف از انجام اين مطالعه طراحي و سنتز كنترل مثبتي ايمن و كارآمد براي تشخيص باكتري بورخولدريا مي باشد. مواد و روش ها در ابتدا، يك سازه شبيه ساز كه، حاوي ژن هاي مرجع و اختصاصي باكتري بورخولدريا ماليي و سودوماليي مي باشد و در ديگر گونه هاي خانواده مشاهده نميشود ساخته شد و سپس كارايي عملياتي سازه طراحي شده، با استفاده از روشPCR Real-Time كمي (با استفاده از رنگ SYBER Green) و كيفي(با استفاده از پروب TaqMan)، مورد ارزيابي قرار گرفت. درنهايت محصولات تكثيري PCR Real-Time با استفاده از منحني ذوب و الكتروفورز مورد بررسي قرار گرفتند. يافته ها ميزان حداقل و حداكثر حساسيت به ترتيب 0/1 پيكو گرم و 10 نانوگرم بر روي سازه طراحي شده در مطالعه حاضر، حاصل شد. نتيجه گيري اين سازه شبيه ساز ميتواند به عنوان كنترل مثبت مناسبي، جهت تشخيص عامل بورخولدريا مورد استفاده قرار گيرد و همچنين مي تواند در آينده باعث پيشرفت هرچه بيشتر كيت هاي تشخيصي جديد در اين حوزه بشود.

the genus Burkholderia (mallei and pseudomallei species) are classified as dangerous human pathogens. Diagnosing cultures for this bacterium is costly and time consuming and on the other hand it is very dangerous to work with and it is very difficult to access this bacterium. the porpose of this research Design and production of a genetically simulant construct for the detection of B. pseudomaleii Material & Methods initially, a simulant construct containing the reference and specific genes of the mallei and pseudomallei species was not observed in other species of the family, and then the operational efficiency of the designed construct was quantified using Real-Time Quantitative PCR. Quality (SYBER Green) and qualitative (using TaqMan probe) were evaluated. Finally, Real-Time PCR amplification products were analyzed by melting curve and electrophoresis. Results the minimum and maximum sensitivity were 0.1 pg and 10 ng on the constructs designed in the present study, was obtained. Conclusion This simulat can be used as a positive control for the detection of the Burkholderia agent and can further enhance the development of new diagnostic kits in the field