مطالعه تجربي بيان Ki67، POU5F1 و zbtb16 در سلول هاي بيضه خوك و موش با استفاده از روش ايمنوسيتوشيميايي و RT-PCR

Experimental Investigation of Ki67, POU5F1, and ZBTB16 Expression in the Pig and Mouse Testicular Cells using Immunocytochemistry and RT-PCR

مقدمه: سلول هاي بنيادي اسپرم ساز، بنيانگذار و نقطه شروع اسپرماتوژنز هستند و تنها سلول هـاي بنيـادي در بـدن بـه شـمار مـي آينـد كـه مي توانند از طريق گامت زايي اطلاعات ژنتيكي را به نسل بعدي منتقل كنند؛ هدف از تحقيق حاضر، بررسي ماهيت پرتواني سلول هاي بنيادي اسپرم ساز در شرايط in vitro و in vivo است. مواد و روش ‌ها: سلول هاي اسپرم ساز از بيضه خوك و موش با استفاده از روش هضم آنزيمي استخراج شده و در محيط حاوي FGF، EGF و GDNF و سلول هاي تغذيه كننده STO كشت داده شدند. سپس براي بررسي ايمنوسيتوشيميايي و RT-PCR كلوني هاي حاصله از ماركرهاي Ki67، POU5F1 و ZBTB16 استفاده شد. يافته ‌هاي پژوهش: ماهيت سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني حاصــله پس از جداسازي و كشت، به وسيله معيار هايي نظير رشد خوشه اي كلني ها در محيط كشت، بيان ماركر Ki67 طي بررسي ايمنوسيتوشيميايي كه بيانگر قابليت تكثير است و شاخص هاي مورفولوژيكي مشاهده شده با ميكروسكوپ الكتروني نگاره، ثابت شد. هم چنين آناليز مقايسه بيان ماركر هاي POU5F1 و ZBTB16 در سلول هاي بنيادي جنيني، سلول هاي بنيادي اسپرم ساز و سلول هاي سرتولي موجود در لوله اسپرم ساز موش با استفاده از روش RT-PCR را در نشان داد. بحث و نتيجه گيري: طي اين پژوهش بيان ماركر هايKi6 ، POU5F1 و ZBTB16 در لوله اسپرم ساز و ويژگي هاي سيتولوژيك سلول هاي بنيادي اسپرم ساز مورد مطالعه قرار گرفت به طوري كه يافته هاي حاصل مي تواند در تحقيقات پيشرفته حوزه بيولوژي توليد مثل مفيد باشد.

Introduction: Spermatogonial Stem Cells (SSC) are the originators and beginning points of the spermatogenesis process. Moreover, they are considered the only stem cells in the body that could transfer genetic information to the next generation through gametogenesis. This study aimed to investigate the potency and power of SSC under in vitro and in vivo conditions. Materials & Methods: Enzymatic digestion technique was utilized to extract the spermatogonial cells of the pig and mouse's testis. They were then cultured in an environment containing FGF, EGF, GDNF, and a feeder layer of STO. For immunocytochemistry and RT-PCR analysis, Ki67, POU5F1, and ZBTB16 markers were used to evaluate the resulted colonies. Ethics code: Ir.ausmt.rec.1398.03.07 through measures, such as cluster growth of the colonies in the culture medium, Ki67 marker expression in the immunocytochemistry review which showed the duplication ability, and the morphological criteria observed by an electron microscope. Moreover, the comparative expression of POU5F1 and ZBTB16 markers in the embryonic stem cells, SSC, and Sertoli cells within the seminiferous tubules of the mouse was analyzed by RT-PCR. Discussions & Conclusions: This experimental study investigated the expression of Ki67, POU5F1, and ZBTB16 in the seminiferous tubules and special cytological features of SCC. The findings are beneficial for future advanced studies in reproductive biology fields.