تاثير كيتوزان بر ميزان تركيبات فنلي، اسيدرزمارينيك و بيان ژن‌هاي كليدي بيوسنتز اسيد رزمارينيك در كشت تعليقي بادرنجبويه (Melissa officinalis L.)

هدف: هدف از اين پژوهش بررسي تاثير كيتوزان بر توليد تركيبات فنلي، اسيد رزمارينيك و بيان ژن هاي كليدي در بيوسنتز اين تركيبات در كشت تعليقي بادرنجبويه بود.مواد و روش‏ها: جهت تهيه كالوس از تركيب نفتالن استيك اسيد (1 ميلي گرم بر ليتر)، توفوردي (1 ميلي گرم بر ليتر) و كينتين (0.5 ميلي گرم بر ليتر) و ريزنمونه ساقه استفاده شد. پس از راه‌اندازي كشت تعليقي، تيمار كيتوزان با سه سطح (0، 50 و 100 ميلي گرم بر ليتر) به مدت يك، سه و پنج روز در قالب آزمايش فاكتوريل بر پايه طرح كاملا تصادفي با سه تكرار انجام شد. فعاليت آنزيم فنيل‌آلانين آمونيالياز، ميزان پروتئين محلول، ميزان تركيبات فنلي و ميزان اسيدرزمارينيك اندازه گيري شد. هم چنين بيان ژن هاي فنيل‌آلانين آمونيالياز و رزمارينيك ‌اسيد سينتاز با روش Realtime PCR بررسي شد.نتايج: فعاليت آنزيم فنيل آلانين آمونيالياز در غلظت 50 ميلي گرم بر ليتر كيتوزان پس ازگذشت سه روز از شروع تيمار بيش‏ترين افزايش را نشان داد كه با افزايش ميزان تركيبات فنلي همراه بود. بيان نسبي ژن فنيل‌آلانين آمونيالياز در غلظت 50 ميلي گرم بر ليتر كيتوزان در زمان سه روز پس از اعمال تيمار نسبت به شاهد 2.5 برابر افزايش نشان داد. اين افزايش بيان ژن، افزايش فعاليت آنزيم فنيل آلانين آمونيالياز را به‏دنبال داشت. بيش‏ترين افزايش بيان ژن رزمارينيك‌اسيد سينتاز در غلظت 100 ميلي گرم بر ليتر كيتوزان پنج روز پس از اعمال تيمار مشاهده شد كه به افزايش ميزان اسيدرزمارينيك منجر شد.نتيجه‏گيري: با توجه به نتايج به‏دست آمده تيمار كيتوزان به‏مدت پنج روز جهت افزايش ميزان اسيد رزمارينيك در كشت سلولي بادرنجبويه توصيه مي شود.