كلون و بيان پروتئين حدت CFP-10 مايكوباكتريوم بويس سويه AN5

زمينۀ مطالعه:سل گاوي به وسيله گونه مايكوباكتريوم بويس ايجاد مي‌شود و اثرات مهمي در بهداشت عمومي و اقتصادي از جمله تجارت حيوانات و توليد دارد. برنامه كنترل مرسوم براساس آزمايش پوستي و كشتار گاوهاي آلوده به سل است. علي‌رغم اعتماد به اين آزمايش، واكنش‌هاي مثبت كاذب از معايب آن به شمار مي‌رود كه جهت رفع آن استفاده از پروتئين‌هايي با ويژگي بالاتر توصيه مي‌گردد. هدف: مطالعه حاضر به منظور كلون، بيان و تخليص پروتئين نوتركيب CFP-10 به عنوان آنتي‌ژن مايكوباكتريوم بويس صورت گرفت. روش‎كار: ژن پروتئين CFP-10 با استفاده از تكنيك واكنش زنجيره پلي‌مراز تكثير شد. محصول واكنش پس از هضم توسط دو آنزيم EcoRI و HindIII در وكتور pET23a(+) كلون شد و بعد از ترانسفورماسيون در سلول DH5α E. coli تكثير گرديد. پس از الحاق و تعيين توالي، وكتور كلون شده در سلول بياني BL21 E. coli ترانسفورم شد. جهت القاء، از ايزپروپيل-دي-بتا-تيوگالاكتوپيرانوزيد استفاده گرديد. جهت انحلال اجسام توده‌اي در پلت سلولي از اوره 8 مولار استفاده شد. پس از تخليص پروتئين نوتركيب با رزين نيكل، حذف اوره با گراديان كاهنده انجام گرفت. نتايج: صحت كلون ژن CFP-10 با تعيين توالي اثبات گرديد. بيان پروتئين CFP-10 با استفاده از مونوكلونال آنتي‌بادي اختصاصي با وسترن بلاتينگ اثبات شد. نتايج تعيين توالي ژن در كنار وسترن بلاتينگ، حاكي از آن بود كه پروتئين نوتركيب بدست آمده در وزن مولكولي حدود 10 كيلو دالتون به خوبي بيان و تخليص گرديده است. نتيجه گيري نهايي: نتايج نشان داد كه ژنcfp10  به خوبي در سيستم پروكاريوتي كلون، بيان گرديد و پروتئين CFP-10 مي‌تواند جهت مطالعات بيشتر در توليد كيت‌هاي تشخيصي عليه سل گاوي مورد استفاده قرار گيرد.