بررسي و مقايسه ماده مؤثره اپي گالوكاتچين گالات در كالوس حاصل از كشت بافت گياه دارويي (Camellia sinensis (L.) Kuntze) به روش نوين استخراج با پليمر قالب مولكولي (MIP)

Evaluation and comparison of the active ingredient epigallocatechingallate in callus obtained from culture of medicinal plant tissue of Camellia sinensis L. Kuntze by modern extraction method with Molecularly Imprinted Polymer MIP

به دليل اهميت اپي گالو كاتچين گالات EGCG” “در گياه چاي در صنايع دارويي و غذايي، به بررسي و مقايسه ميزان EGCG در عصاره برگ جوان (دوبرگي) و مسن و كالوس گياه پرداخته و اقدام به جداسازي و اندازه‌گيري EGCG در عصاره كالوس به روش پليمر قالب مولكولي MIP در سال 1397در داروسازي گياه اسانس شد. جهت توليد و تحريك كال‌زايي، كالوس گياه چاي برداشت شده از منطقه غرب مازندران در محيط‌هاي كشت MS، SH و WPM با مقادير مختلف از هورمون‌هاي گياهي كشت شد. برگ و كالوس با متانول 70 درصد به روش ماسراسيون عصاره-گيري شدند. براي خالص سازي EGCG از عصاره كالوس، مقدار نانولوله‌ي چند ديواره و عامل‌دار كربن (MWCNTs) در محدوده‌ي 10-1 ميلي‌گرم، در ساخت CNTs-MIP بررسي و بهينه شد. EGCG در عصاره كالوس با CNTs-MIP ، استخراج و ميزان آن با كروماتوگرافي فاز مايع تعيين شد. بيشترين حجم كالوس در محيط WPM و بيشترين ميزان EGCG در محيط SH با غلظت بهينه از هورمون‌هاي BA (2 mg/L), 2,4-D (0.5 mg/L)، مشاهده شد. افزودن 8 ميلي‌گرم از MWCNTs به ساختار پليمر، ميزان بيشتري از EGCG را استخراج نمود. EGCG در برگ جوان و مسن و كالوس گياه به ترتيب 34/37، 19/7، 13/0 ميلي‌گرم در گرم مي‌باشد. ميزان EGCG در كالوس با استفاده از CNTs-MIP، 91/0 ميلي‌گرم در گرم محاسبه شد. با وجود مقدار كم EGCG در كالوس، با استفاده از CNTs-MIP مقدار اين ماده با ضريب تغليظ 8 برابري قابل اندازه‌گيري و بيانگر كارايي اين تكنيك مي باشد.

Due to the importance of the active ingredient epigallocatechin gallate (EGCG) in tea plant in pharmaceutical and food industries, the amount of EGCG in young leaf, old leaf and callus extract was measured and compared. EGCG in callus extract was isolated and measured by Molecularly Imprinted Polymer (MIP) technique in 2019 in Giah Essence Phytopharm Company. In order to induce callus production, callus of tea plant harvested from the western region of Mazandaran province was cultured in WPM, SH, MS media with different amounts of plant hormones. Leaves and callus extracted with 70% methanol by maceration method. For optimization of extraction and purification, various quantities of functional multiwalled-CNTs 1-10 mg were used for production of CNTs-MIP. EGCG of callus extract was extracted with CNTs-MIP and its amount was determined with HPLC. The highest volume of callus in WPM medium and the highest amount of EGCG in SH medium was observed with optimized concentrations of hormones BA (2 mg/l), 2, 4_D (0.5 mg/l). The highest content of EGCG was extracted by adding 8 mg of MWCNTs in the polymer structure. EGCG in young and old leaves and callus were 37.34, 7.19 and 0.13 mg/g of dried weight, respectively. By CNTs-MIP, the obtained EGCG content in callus was 0.91 mg/g. Despite the low amount of EGCG in callus, using CNTs-MIP, the amount of this substance are measureable with a concentration coefficient of 8 times and indicates the efficiency of this technique.