بررسي كلون و بيان هورمون نوتركيب انساني پاراتيروئيد در مقياس آزمايشگاهي

حفظ سطح غلظت كلسيم خون يك فرايند پويا است كه با بر هم كنش چند عضو مانند روده، كليه و غده هاي پاراتيروئيد صورت مي گيرد. هورمون انساني پاراتيروئيد (hPTH)با افزايش جذب روده اي كلسيم و كاهش دفع كليوي موجب افزايش سطح كلسيم خون مي شود. از آنجايي كه در صورت ناكافي بودن مقدار كلسيم در خون، به طور معمول اين عنصر از استخوان ها برداشته مي شود بنابراين كمبود اين هورمون باعث پوكي استخوان و بيماري هاي ناشي از اختلال هاي غده هاي پاراتيروئيد مي شود. در اين پژوهش از پلاسميد Puc 57  و سويه Escherichia coli DH5α براي كلون كردن و از پلاسميد Pet 32a(+) و سويه Escherichia coli BL21  براي بيان پروتئين استفاده شدند. در اين پژوهش توليدپروتئين به صورت ناپيوسته در ارلن هاي يك ليتري و همچنين به صورت ناپيوسته به همراه خوراك دهي در يك فرمانتور 10 ليتري همزن دار بررسي شد. طبق نتيجه هاي اين پژوهش، كشت ناپيوسته در ارلن ها نشان داد كه پس از 16 ساعتمقدار زيست توده و پروتئين نو تركيب به ترتيب به  g/L 6.5 و  g/L 1.7  مي رسد. همچنين در حالت ناپيوسته به همراه خوراك دهي، بيش ترين مقدار زيست توده و پروتئين نو تركيب درون فرمانتور پس از 12 ساعت به ترتيب به g/L 81 و g/L22 به دست آمد. سرانجام توليد پروتئين نوتركيب با دو آزمايش SDSPAGE   و Western blot  مورد تاييد قرار گرفت.در اين پژوهش وجود باند پروتئيني در  ناحيه 37 كيلو دالتون نشان دهنده درستي بيان هورمون پاراتيروئيد مي باشد. با توجه به توليد موفقيت آميز هورمون انساني پاراتيروئيد در اين پژوهش و همچنين مزيت هاي باكتري اشريشاكولي به عنوان ميزبان، به نظر مي رسد اين روش مي تواند جايگزين مناسبي براي توليد اين ماده ارزشمند دارويي باشد.