عنوان مقاله :
بهينه‌سازي بيان و تخليص پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي انگل توكسوكارا كنيس در باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21(DE3)
پديد آورندگان :
شه بخش ، مهسا دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه انگل شناسي , جالوسيان ، فاطمه دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه انگل شناسي , حسيني ، حسين دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه انگل شناسي , شايان ، پرويز دانشگاه تهران - دانشكده دامپزشكي - گروه انگل شناسي , ناصر مقدسي ، عبدالرضا دانشگاه علوم پزشكي تهران - مركز تحقيقات ام اس, پژوهشكده علوم و اعصاب
كليدواژه :
توكسوكارا كنيس , پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي , باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21(DE3) , باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21 , پلاسميد pET32a
چكيده فارسي :
زمينۀ مطالعه: توكسوكاريازيس يك بيماري مهم زئونوز است كه توسط نوزاد مرحله دوم توكسوكارا كنيس و توكسوكارا كتي ايجاد مي‌شود. در خيلي از كشورهاي معتدل توكسوكاريازيس رايج‌ترين عفونت كرمي است و سبب بروز عوارض شديد مي‌شود. لكتين نوع سي از محصولات توليدي در مرحله نوزادي اين انگل است. اين پروتئين در واكنش‌هاي ايمني ازجمله ارسال سيگنال سلول‌هاي ايمني در مهره‌داران، فعال كردن ايمني ذاتي در مهره‌داران و بي‌مهرگان و القا هموستاز دخالت دارد.هدف: مطالعه حاضر با هدف بهينه‌سازي توليد پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي انگل توكسوكارا كنيس و بررسي خواص آنتي‌ژني (پادگني) آن صورت گرفته است.روشكار: توالي نوكلئوتيدي مرجع مربوط به لكتين نوع سي(CTL) انگل توكسوكارا كنيس از بانك ژن استخراج شد. سپس پلاسميد pET32a حاوي توالي مورد نظر توسط شركت GENERAY سنتز گرديد. پلاسميد نوتركيب به باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21(DE3) منتقل شد. بيان اين پروتئين با استفاده از روش‌هاي SDSPAGE و دات بلات بررسي و با سرم انساني مثبت، مورد تأييد قرار گرفت.نتايج: مطالعه حاضر نشان داد كه بهينه‌سازي شرايط براي دستيابي به بيشترين ميزان توليد پروتئين با انتخاب باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21(DE3)، دماي 37 درجه سانتي‌گراد پس از القا و غلظت 1 ميلي‌مولارIPTG حاصل گرديد. پس از بهينه‌سازي پروتئين نوتركيب با غلظت 0.6±1160ميكروگرم بر ميلي‌ليتر استخراج شد. وزن مولكولي پروتئين حاصل 42 كيلودالتون بود. پاساژ پلاسميد نوتركيب قبل از القا، در باكتري اشريشيا كلاي سويه DH5α باعث افزايش معني‌دار بيان پروتئين گرديد. نتايج ارزيابي بهينه‌سازي شرايط، با روش‌هاي SDSPAGE و دات‌بلات نشان داد كه بيشترين ميزان توليد پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي انگل توكسوكارا كنيس در شرايط بهينه‌سازي حاصل شده است.نتيجه گيري نهايي: جهت توليد هر پروتئين نوتركيب به‌ويژه در مقادير زياد و به‌منظور مصارف تجاري لازم است كه بهينه‌سازي مخصوص آن پروتئين، انجام شود و دقيقاً براساس شرايط بهينه‌سازي تعيين‌شده، توليد پروتئين نوتركيب قابل انجام است. نتايج مطالعه حاضر نشان داد كه شرايط بهينه جهت توليد پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي، انتخاب باكتري اشريشيا كلاي سويه BL21(DE3)، دماي 37 درجه سانتي‌گراد و مدت زمان 4 ساعت پس از القا است كه با حفظ ويژگي‌هاي ايمني‌زايي نيز همراه است. به‌طوركلي مي‌توان چنين نتيجه‌گيري كرد كه سويه باكتري انتخاب شده و همچنين دما و زمان القا بر ميزان بيان و توليد پروتئين‌هاي نوتركيب مانند لكتين نوع سي انگل توكسوكارا كنيس تأثير مستقيم دارد.
عنوان نشريه :
تحقيقات دامپزشكي
عنوان نشريه :
تحقيقات دامپزشكي
