اثر افزودن گلوتاتيون احيا به رقيق كننده بر پايه نانوذره لسيتين بر انجمادپذيري اسپرم گاو

Effect of supplementation of lecithin nanoparticles-based extender with reduced glutathione on freezability of bull sperm

هدف از اين پژوهش ، بررسي اثر افزودن گلوتاتيون احيا به رقيق­كننده بر پايه نانوذره لسيتين بر كيفيت اسپرم گاو پس از فرايند انجماد و يخ‌گشايي بود به همين منظور چهار سطح آنتي­اكسيدان گلوتاتيون (صفر، يك، 2/5 و پنج ميلي­مولار) در رقيق­كننده بر پايه نانوذرات لسيتين ارزيابي شد. اندازه ذرات ليستين تهيه شده با استفاده از دستگاه سونيكاتور به ابعاد نانو كاهش يافت. 48 انزال طي سه هفته از شش رأس گاو نر هلشتاين با ميانگين سني سه تا چهار سال جمع­آوري و منجمد شد. صفات مورد ارزيابي پس از انجماد و يخ‌گشايي شامل، فراسنجه­هاي جنبايي با CASA، فعاليت غشاي سلول­ (هاست) و يكپارچگي غشا (ائوزين- نگروزين) ريخت‌شناختي اسپرم (محلول هانكوك) بود. نتايج نشان داد كه استفاده از2/5 ميلي­مولار گلوتاتيون در رقيق­كننده جنبايي كل و جنبايي پيش‌رونده را افزايش داد (به‌ترتيب 1/5±63/38 و 1/1±43/1) (p <0/05). درصد زنده­ماني و سلامت غشاي اسپرم در تيمار حاوي 2/5 ميلي­مولار بيش‌تر از ساير تيمارها بود. به‌نظر مي­رسد، غلظت 2/52 ميلي­مولار گلوتاتيون مي‌تواند غلظت بهينه رقيق­كننده انجمادي گاو بر پايه نانوذره لسيتين باشد. كليدواژه‌ها

This study was designed to add the reduced glutathione to a lecithin nanoparticle-based extender and evaluate the quality of bull sperm after freezing and thawing. In the present study, the effect of four different levels of glutathione (0, 1, 2.5 and 5 mM) in extender-based on lecithin nanoparticles was evaluated. The lecithin nanoparticles were prepared and the particle size was reduced by using a sonicator device. During three weeks, 48 ejaculates from six Holstein bulls were collected and frozen. Properties evaluated after freezing and thawing were kinetic parameters (CASA), membrane activity (HOST), membrane integrity (eosin-nigrosine) and morphology (Hancock solution). The results showed that using 2.5 mM glutathione in the extender significantly increased total and progressive motility (63.38±1.5 and 43.1±1.1 respectively, P <0.05). The results of eosin-nigrosine staining and Host test showed that the highest viability and cell membrane functionality were related to 2.5 mM treatment (64.8±1.5 and 58.1±1.1 respectively) (p < 0.05). In general, 2.5 mM glutathione could improve the quality of bull sperm compared with other concentrations after freezing and thawing process. It seems that the 2.5 mM glutathione is optimum concentration for bull extender based on the lecithin nanoparticles.