تأثير دوستاكسل براسكلت سلولي تخمك موش سوري پس از انجماد شيشه‌اي به روش كرايوتاپ

Evaluation of the effect of docetaxel on cryotop-vitrification of mouse oocytes

دوستاكسل به‌ عنوان يك عامل پايداركننده مي‌تواند به‌ طور بالقوه آسيب وارد شده به اسكلت سلولي تخمك را در طول انجماد شيشه‌اي كاهش دهد. هدف از مطالعه حاضر بررسي تأثير داروي دوستاكسل بر روي درصد بقا و لقاح آزمايشگاهي تخمك‌ها پس از انجماد شيشه‌اي مي‌باشد. موش‌هاي ماده نژاد NMRI با سن 8 تا 10 هفته با تزريق هورمون‌هاي PMSG و HCGتحريك تخمك‌گذاري شدند. با استفاده از آنزيم هيالورونيداز 0/1% توده سلولي كومولوس اطراف تخمك برداشته شد. سپس تخمك‌ها به 5 گروه آزمايشي شامل گروه‌هاي كنترل، دوستاكسل، دوستاكسل+ محلول انجمادي، دوستاكسل+ انجماد شيشه‌اي و انجماد شيشه‌اي تقسيم شدند. تخمك‌هاي بالغ در محلول‌هاي انجمادي اتيلن گليكول و دي متيل سولفوكسايد با غلظت 15 درصد و ساكارز 0/5 مولار منجمد شدند. پس از ذوب، درصد بقا و لقاح آنها تا مرحله دو سلولي بررسي گرديد. رنگ‌آميزي ميكروتوبول‌ها در تخمك‌ها با آنتي‌بادي آلفاتوبولين انجام شد. ميزان لقاح هر گروه در مقايسه با گروه كنترل كاهش قابل‌توجهي نشان داد (0/001P =). ميزان تشكيل جنين‌هاي دو سلولي در هر دو گروه انجمادي (دوستاكسل+ انجماد شيشه‌اي و انجماد شيشه‌اي) به‌طور قابل‌توجهي نسبت به غيرانجمادي كنترل (0/001P=) و دوستاكسل (0/004P =) پايين تر بود. نتايج نشان داد درصد بقا و لقاح در گروه‌هاي پيش انكوبه شده با دوستاكسل بيشتر از گروه‌هاي انكوبه نشده بود، بنابراين دوستاكسل با كاهش آسيب‌هاي وارده به اسكلت سلولي تخمك مي‌تواند در بهبود تكنيك هاي توليد مثلي مؤثر باشد.

As a stabilizing agent, docetaxel can potentially reduce the damage to the oocyte cytoskeleton during vitrification. The aim of the present study was to investigate the effect of docetaxel on the survival rate and in vitro fertilization of oocytes after vitrification. NMRI mice (8-10 weeks old) were superovulated by injecting PMSG and HCG. Oocytes are surrounded by cumulus and corona cells and must be denuded by 0.1% hyaluronidase enzyme. The oocytes were then divided into 5 experimental groups including control, docetaxel, docetaxel+vitrification solution; docetaxel+ vitrification and vitrification. Mature oocytes were vitrified in ethylene glycol and dimethyl sulfoxide solutions at 15% concentration and 0.5 M sucrose. After thawing, their survival and fertilization rates were assessed up to the two-cell stage. Staining of the microtubules in the oocytes was performed with alpha-tubulin antibody. The fertilization rate of each group showed a significant decrease compared to the control group (P=0.001). The rate of formation of 2-cell embryos in both vitrified groups (docetaxel+ vitrified and vitrified vitrified) was significantly lower than non-vitrified (control (P=0.001) and docetaxel ((P=0.004)). The results showed that survival and fertilization rates in pre-incubated groups with docetaxel were higher than non-incubated groups, so docetaxel could improve reproductive techniques by reducing the damage to the oocyte cytoskeleton.