شناسايي باكتري‌هاي روده گونه موريانه Microcerotermes diversus Silvestri (Isoptera: Termitidae) و جداسازي باكتري‌هاي تجزيه كننده ليگنين

Variation of Microcerotermes diversus Silvestri (Isoptera: Termitidae) Gut Bacteria and Isolation of Gut Lignin-Degrading Bacteria

ليگنين فراوان ترين پليمر معطر (فنلي) و دومين ماده اوليه فراوان در محيط زيست است. ليگنين در طبيعت توسط باكتري­ها و قارچ­ها تخريب مي­شود. جهت ارزيابي نقش باكتري­هاي همزيست موريانه­ها در تخريب ليگنين، چهار كلني از گونه موريانه Microcerotermes diversus Silvestri (Termitidae) كه از طريق تله­گذاري در مناطق اهواز، بندرعباس و دو جزيره خارك و كيش جمع­آوري شدند. سوسپانسيون روده موريانه­هاي هر منطقه در 5 ميلي ليتر D.H2O تهيه شد. نمونه­ها در محيط كشت مغذي آگار (NA) كشت داده شدند. پتري ديش­هاي حاوي نمونه كشت داده شده در دماي 270C به مدت 24-72 ساعت درانكوباتور قرار گرفتند. كلني باكتريايي متنوع با مورفولوژي­هاي متفاوت انتخاب و خالص سازي شدند. براي تمايز باكتري­هاي تجزيه كننده ليگنين، تمام 47 جدايه باكتريايي برروي محيط كشت حاوي آگار ليگنين مختلف استخراج شده حاوي MSM رشد داده شدند. در مجموع، 45 جدايه از نظر تجزيه ليگنين مثبت بودند. تعيين توالي 16S rDNA در تركيب با روش­هاي كشت كلاسيك براي شناسايي باكتري­ها استفاده شد. شناسايي شامل جنس / گونه Stenotrophomonas maltophilia ، Elizabethkingia anopheles ، Ochrobactrum anthropic ، Serratia marcescens ، Lysinibacillus pakistanensis ، Actinetobacter pitti ، Pseudomonas spp. و Bacillus spp بودند. براي تعيين ميزان فعاليت ليگنينوليتيك ، باكتري­ها از خانواده­هاي شناسايي شده در محيط ليگنين آگار پرورش داده شدند. هيدروليز ليگنين با استفاده از متيلن بلو بر روي محيط كشت مورد بررسي قرار گرفت. حاله­ هاي ايجاد شده دراطراف كلني باكتري­ها اندازه گيري شدند.

Lignin is the most abundant aromatic (phenolic) polymer and the second most plentiful raw material in the terrestrial environment. It is degraded by bacteria and fungi in the natural world. To evaluate whether the role of symbiotic bacteria in lignin degradation among termites, four colonies of Microcerotermes diversus Silvestri (Termitidae) were collected from traps in Ahvaz, Bandar Abbas, and two islands of Khark and Kish. Sample suspensions were prepared from guts in 5 ml D.H2O. The samples were cultured on nutrient agar (NA) medium. The plates were incubated at a temperature of 270C for 24-72 h. Different types of bacteria with different colony morphologies were selected and purified. To differentiate lignin-degrading bacteria, all 47 bacterial isolates were grown on different extracted lignin agar containing MSM. In total, 45 isolates were positive for lignin degradation. Culture-independent 16S rDNA sequencing in combination with classical culturing methods were applied to identify the bacteria. These were assigned to genus/species Stenotrophomonas maltophilia, Elizabethkingia anopheles, Ochrobactrum anthropic, Serratia marcescens, Lysinibacillus pakistanensis, Actinetobacter pitti, Pseudomonas spp., and Bacillus spp. To specify the amount of ligninolytic activity, family selected bacteria were grown on lignin agar medium. Dye decolorization in culture plate assays with Methylene Blue was evaluated. Clear zones in agar around the isolates were measured.