تنوع ژنتيكي عقرب هوتنتوتا زاگروسنسيس و سلسئي با استفاده از تكنيك (RAMS (Random Amplified Microsatellites در خوزستان

Genetic Diversity of Hottentotta Zagrosensis and H. saulcyi (Scorpions: Buthidae) using RAMS (Random Amplified Microsatellites) in Khuzestan

عقرب­ هاي خانواده بوتيده داراي جنس ­هاي متنوعي در جهان و از جمله در ايران­اند كه يكي از آن­ها جنس هوتنتوتا است. علي­رغم اين كه اين عقرب يكي از چند عقرب مهم از لحاظ پزشكي است، تا كنون مطالعه ­ي ملكولي در خصوص روابط فيلوژنتيكي آن در ايران صورت نگرفته است. در اين مطالعه، 10 نمونه­ از هر كدام از عقرب ­هاي گونه هوتنتوتا زاگروسنسيس و سلسئي از مناطق مختلف استان خوزستان جمع­آوري گرديد و سپس جهت بررسي­ تنوع ژنتيكي با استفاده از تكنيكRAMS (Random Amplified Microsatellites) و PCR-RFLP مورد مطالعه قرار گرفتند. آغازگر P-CCA از بين 6 آغازگر RAMS كه به كمك واكنش PCR مورد استفاده قرار گرفت، باندهاي واضح و تكرارپذيري توليد كرد. از 20 نمونه عقرب هوتنتوتا زاگروسنسيس و سلسئي تعداد كل 78 باند توليد شد كه از اين تعداد باندهاي پلي­مورفيك و مونو مورفيك به ترتيب، 8/94 و 2/5 بودند. اندازه­ي باندهاي توليد شده با استفاده از اين آغازگر بين 200 تا 1000 نوكلئوتيد متفاوت بود. پس از امتيازدهي الگوي باندهاي حاصله بر روي ژل الكتروفورز، گروه ­بندي نمونه­ ها با استفاده از ضريب شباهت دايس و الگوريتم UPGMA انجام شد. نتايج دندروگرام نشان داد كه نمونه­ هاي مربوط به هوتنتوتا زاگروسنسيس و سلسئي با ضريب تشابه به ترتيب، 65/0 و 60/0 در يك گروه قرار گرفتند، هرچند كه ناهمگوني بين نمونه ­هاي دو گونه مشاهده شد. دو نمونه گردآوري شده از دزفول (HZ9 و SE5) از بقيه­ ي نمونه­ هاي هم­گروه خود كاملاً متفاوت بودند، كه اين نتيجه به وسيله ­ي آزمايش PCR-RFLP مورد تأييد قرار گرفت. نتايج حاصل از تحليل دندروگرام تنوع و جدايي ژنتيكي درون گونه ­اي اعضاي جمعيت عقرب جنس هوتنتوتا در استان خوزستان را نشان داد. اين مطالعه كاربرد استفاده از تكنيك RAMS به عنوان ابزاري به منظور بررسي تنوع ژنتيكي عقرب­ ها در اين منطقه را نشان مي­دهد.

Scorpions belong to the Buthidae family have several genera in the World. One of the genuses is Hottentotta which is located in Iran. There is no phylogenetic data regarding to this scorpion, in spite of its medical importance. Ten scorpion samples of Hottentotta Zagrosensis and H. saulcyi were collected from different regions of Khuzestan province in Iran. The molecular phylogenetic analysis was carried out using RAMS (Random Amplified Microsatellites) and PCR-RFLP. Of the 6 RAMS primers, that were checked, P-CCA generated 78 sufficiently clear and reproducible bands. The band sizes from 20 scorpion samples ranged from 200-1000 bp. The percentages of the polymorphic and monomorphic bands are 94.8 and 5.2%, respectively. After band score calculations, the similarity level was measured using the Dice coefficient, and denderogram were obtained by the UPGMA algorithms. The results show that the scorpions within the Hottentotta genus has been grouped in two species H. zagrosensis and H. saulcyi with mean percentage of shared bands 65% and 60%, respectively. Two scorpion samples from Dezful (HZ9 and HS5) are significantly dissimilar within their groups. This result was confirmed by PCR-EFLP. Denderogram results for scorpions in Hottentotta genus located in the Khuzestan showed intraspecies genetic diversity. This study shows RAMS primers could be useful tools to assess genetic diversity in Huttentotta scorpions in Khuzestan.