كاربرد تكنيك DNA باركدينگ و استفاده از نشانگرهاي مولكولي در شناسايي كك ها

Application of DNA Barcoding and Use of Molecular Markers in the Identification of Fleas

زمينه و هدف: كك ها حشرات كوچكي از راسته سيفونپترا (Siphonaptera)، بدون بال و بيضي شكل هستند كه بدن آن ها در طرفين فشرده شده است. نقش آن ها در انتقال برخي از عوامل بيماري زا و ايجاد بيماري هاي زئونوز مانند طاعون و تيفوس آندميك تاييد شده است. با توجه به تنوع و نزديك بودن ويژگي هاي ريخت شناسي، شناسايي دقيق گونه ها و زيرگونه هاي كك بر اساس مشخصات ريختي مشكل است. استفاده از نشانگرهاي مولكولي و باركدگذاري ژنتيكي با استفاده از يك يا چند بخش كوچك ازDNA به عنوان بخش استاندارد شده ژنوم يك روش رده بندي مناسب جهت شناسايي گونه هاست. هدف از اين مطالعه ارزيابي روابط فيلوژنتيكي چياستوپسيلا گودفري با استفاده از تعيين‌توالي قسمتي از ژن سيتوكروم اكسيداز زير واحد 1 (COI)، با استفاده از روش‌هاي زيست سنجي و مولكولي است. روش كار: اين مطالعه در تمامي فصول سال 2017 در ذخيره گاه طبيعي Telperian/Ezemvelo واقع در استان خاتينگ آفريقاي جنوبي انجام شد. به منظور صيد جوندگان از تله هاي زنده گير شرمن استفاده گرديد. با استفاده از پنس تمامي كك هاي مستقر بر روي بدن ميزبان جمع آوري و در الكل 70 درصد نگهداري و جهت انجام بررسي ريختي و مولكولي به آزمايشگاه منتقل شد. يافته ها: نتايج بررسي ريختي بين نمونه هاي جمع آوري شده نشان داد كه دوريختي جنسي بين افراد نر و ماده اين كك به استثناي متغير طول بدن مي باشد وجود ندارد (P<0.05). ترسيم درخت تبارزايي توالي ژن مورد مطالعه نشانگر تفاوت جزيي در افراد جمعيت مورد مطالعه مي باشد. نتيجه گيري: بر اساس نتايج درخت فيلوژني، با وجود اختلافات جزيي همه نمونه ها در يك كلاد قرار گرفتند. نتايج اين مطالعه مؤيد اين است كه توالي COIمي‌تواند در مطالعه تعيين و بررسي روابط تبارشناسي كك‌ها مورد استفاده قرار گيرد.

Introduction & Objective: Fleas are small insects of the order Siphonaptera, wingless and oval, their bodies are compressed on both sides. Their role in transmitting some pathogens and causing zoonotic diseases has been confirmed. Using molecular markers and genetic barcoding using one or more small pieces of DNA as a standardized part of the genome is a good classification method to identify species. The aim of this study was to evaluate the phylogenetic relationships of an endemic flea in South Africa using sequencing of part of the cytochrome oxidase subunit 1 (COI) gene using morphometric and molecular methods. Materials and Methods: This study was conducted in 2017 in the Telperian/Ezemvelo Nature Reserve in South Africa. Sherman live traps were used to catch rodents. Fleas were removed from their hosts using forceps, and mice were released at their point of capture within the same day. Fleas were stored in 70% alcohol and transferred to the laboratory for morphological and molecular analysis. Results: The results of morphological analysis of the collected samples showed that there is no sexual dimorphism between males and females of this species except for the body length variable (P <0.05). The phylogenetic tree showed a slight difference in the study population. Despite minor differences, all specimens were placed in a clad. Conclusion: The results of this study confirm that the COI sequences can be used to study the genealogical relationships of fleas.