تأثير ويتامين C بر مقاومت دارويي 5-FU در سلول‌هاي سرطاني كولون HT29

Investigation of the Effects of Vitamin C on Resistance to 5-FU in Colon Cancer Cells Line HT29

امروزه، تحقيقات گسترده‌اي در استفاده از آنتي‌اكسيدانت‌ها در كاهش آثار جانبي شيمي داروها و شكستن مقاومت سرطان نسبت به شيمي ‌دارو در حال انجام است. هدف اين مطالعه نيز، استفاده از ويتامين C به‌عنوان آنتي‌اكسيدانت و تعيين تأثير آن در مقاومت دارويي سلول‌هاي HT29 است. مواد و روش‌ها: در طول اين مطالعۀ مورد_شاهدي، ابتدا سلول‌هاي HT29 كشت داده شدند و با استفاده از روش MTT assay، تكثير سلولي و يا مرگ سلول‌ها در تيمار با ويتامين C و داروي5-FU بررسي گرديد؛ همچنين آزمون DAPI براي نشان دادن آپوپتوز سلولي صورت گرفت. پس از استخراج RNA و تهيۀ cDNA، براي تعيين سازوكار مولكولي آپوپتوز توسط دارو و اثر مهاركنندگي و يا تشديد ويتامين C بر سيگنالينگ سلولي آپوپتوز، بيان ژن‌هاي مرتبط با رشد و آپوپتوز ماركرهاي casp3, Bax به روش Real-time PCR سنجيده شد. يافته‌هاي پژوهش: نتايج به‌دست‌آمده از آزمايش MTT نشان داد كه ويتامين C هيچ تأثير معنا‌داري (P<0.05) در كاهش اثر 5-FU در آپوپتوز سلول‌ها ندارد. نتايج دپي و DNA ladder assay به‌دست‌آمده از تيمار سلول‌هاي HT29 تغييرات كيفي آپوپتوز سلولي را نشان داد. علاوه بر اين، نتايج Real-time PCR نشان داد افزايش معنا‌داري در بيان ژن Bax و Casp3 بر سلول‌هاي سرطاني كولون HT29 در تيمار با شيمي‌ دارو وجود دارد. بحث و نتيجه‌گيري: يافته‌ها نشان داد ويتامين C مانع تأثير شيمي ‌دارو نشد، اگرچه هيچ تأثير مثبتي هم بر روي رشد سلول‌هاي سرطاني نداشت؛ بنابراين، مصرف ويتامين C از سوي بيماراني كه در حال شيمي‌درماني هستند، هيچ ممانعتي بر تأثير دارو نخواهد داشت و مي‌تواند بيمار را از آثار جانبي دارو محافظت كند.

Introduction: There is growing evidence about the use of antioxidants to reduce the side effects of chemotherapy and cancer drug resistance. Therefore, this study aimed to use vitamin C as an antioxidant and determine its effect on drug resistance in HT29 cells. Materials & Methods: During this case-control study, HT29 cells were first cultured and evaluated by MTT assay for cell death in the presence of vitamin C and 5FU. DAPI staining was also performed to visualize cell apoptosis. After RNA extraction and cDNA preparation, to determine the molecular mechanism of apoptosis by the drug and the inhibition effect or aggravation of vitamin C on cellular signaling of apoptosis, expression of growth-related genes and apoptosis of Caspase-3 and Bax were measured by real-time PCR. Findings: The results of the MTT test showed that vitamin C had no significant effect on cell apoptosis induced by 5-FU. DAPI and DNA ladder assay results from HT29 cells showed qualitative changes in cell apoptosis. In addition, real-time PCR results revealed increased expression of Bax and Caspase-3 in HT29 colon cancer cells treated with chemotherapy. Discussions & Conclusions: Our findings showed that vitamin C did not prevent the effect of chemo drug although it had no positive effect on the growth of cancer cells. Therefore, vitamin C intake by patients undergoing chemotherapy will not affect the drug's effect on the tumor and may protect the patient from side effects.