طراحي و تهيه وكتور يوكاريوتي حامل ساختار فيوژن پلي اپي توپي L1-E7 ويروسهاي پاپيلوماي انساني پر خطر

Design of Eukaryotic Vector Harboring L1-E7 Polyepitope Fusion Construct of High Risk Human Papillomaviruses

ابقه و هدف آلودگي به HPV به عنوان اصلي ترين دليل سرطان دهانه رحم شناخته مي شود. اين سرطان در دنيا، چهارمين سرطان شايع در ميان زنان است. طراحي DNA واكسني كه علاوه بر پيشگيري، ويژگي هاي درماني نيز داشته باشد مي تواند در كاهش ابتلا و مرگ و مير تاثير چشمگيري داشته باشد. مواد و روش ها توالي ژني شامل اپي توپ هاي ايمونوژنيك و حفاظت شده پروتئين هاي L1 و E7 ويروس هاي پاپيلوماي انساني پر خطر طراحي گرديد. پس از سنتز ساختار فيوژن L1-E7 در وكتور كلونينگ pUC57، ساب كلون كردن آن در وكتور يوكاريوتي pcDNA3.1(-) انجام شد. غلظت و خلوص پلاسميد نوتركيب pcDNA-L1E7 توسط اسپكتروفتومتري نانودراپ تعيين شد. يافته ها توالي ژني موردنظر پس از برش از pUC57-L1E7 توسط آنزيم هاي محدود الاثر BamHI/HindIII، در جايگاه مشابه وكتور pcDNA3.1(-) ساب كلون شد. تاييد حضور ژن در وكتور توسط هضم آنزيمي با BamHI/HindIII، قطعه 639 جفت بازي مربوط به ژن را روي ژل آگارز 1 درصد نشان داد. پلاسميد نوتركيب pcDNA-L1E7 توسط كيت استخراج فاقد اندوتوكسين به منظور جداسازي ليپوپلي ساكاريد باكتري تخليص شد. غلظت DNA تخليص شده، حدود 1474 نانوگرم/ ميكروليتر به دست آمد. نتيجه گيري كلونينگ ساختار فيوژن L1-E7 در وكتور يوكاريوتي با موفقيت انجام گرفت. در مراحل بعدي از وكتور نوتركيب براي تحقيقات درون تني واكسن ژني استفاده خواهد شد.

of cervical cancer. Cervical cancer is the fourth most common cancer among women in the world. Designing a DNA vaccine with therapeutic properties as well as prevention can have a significant impact on reducing morbidity and mortality. Materials and Methods: Gene sequences including the immunogenic and conserved epitopes of L1 and E7 proteins of high-risk papillomaviruses were designed. After synthesis of the L1-E7 fusion construct in pUC57 cloning vector, its subcloning was performed in pcDNA3.1 (-) eukaryotic vector. The concentration and purity of the recombinant pcDNA-L1E7 plasmid was determined by Nanodro‎p spectrophotometry. Results: The gene sequence after cutting from pUC57-L1E7 by BamHI/HindIII restriction enzymes, was subcloned in the same cloning site of pcDNA3.1 (-) vector. The presence of gene was confirmed by digestion with BamHI/HindIII enzymes, as a 639 bp fragment on 1% agarose gel. The recombinant pcDNA-L1E7 plasmid was purified by endotoxin-free extraction kit for isolation of bacterial lipopolysaccharide. The concentration of the purified DNA was obtained about 1474 ng/ μl. Conclusion: Cloning of the L1-E7 fusion construct in the eukaryotic vector was successful. In the next steps, the recombinant vector will be used for gene vaccine studies in vivo.