تخليص و تغليظ ويروس هاري با استفاده از فيلتراسيون جريان مماسي (TFF) جهت توليد واكسن هاري دامي

Clarification and Concentration of Rabies Virus using Tangential Flow Filtration (TFF) for Veterinary Rabies Vaccine Production

زمينه مطالعه جهت ساخت واكسن هاري دامي از سلول BHK-21 و ويروس سويه پاستور استفاده مي شود. اگرچه پروتكل هاي مختلفي براي خالص سازي در پروسه توليد واكسن پيشنهاد شده است ليكن اين پروتكل ها اثرات منفي بر محصول نهايي دارند و نيازمند بهينه سازي مي باشند. هدف در مطالعه حاضر تلاش شد تا روش تغليظ و خالص سازي ويروس مورد استفاده جهت ساخت واكسن هاري دامي بهينه سازي گردد. روش كار ابتدا ويروس هاري سويه پاستور در سلول هاي BHK-21 به مدت 5 روز با كمكDMEM ، 7 درصد سرم جنين گاوي كشت داده شد. سپس خالص سازي با استفاده از فيلتراسيون جريان مماسي (TFF) انجام شد. كيفيت ويروس هاي خالص سازي شده از طريق تيتراسيون ويروسي و الكتروفورز عمودي سنجيده شد. سپس غيرفعال شدن نمونه ها توسط بتاپروپيولاكتون انجام و در شرايط درون تني و برون تني مورد بررسي قرارگرفت. در نهايت، قدرت و كارايي واكسن فرموله شده با روش NIH مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج مطالعه تيتراسيون ويروسي در نمونه هاي TFF نشان دهنده افزايش تيتر ويروسي در مقايسه با گروه كنترل بود (05/0

BACKGROUND: The veterinary Rabies vaccine was produced using BHK-21 cells and PV strain. Although various protocols have been suggested for virus purification, they have an adverse effect on the final production and require further optimization. OBJECTIVES: The present study aimed to optimize the concentration and purification of the virus for rabies vaccine production. METHODS: First of all, the Pasteur virus strain (PV) was cultured by using BHK 21 cells with DMEM media contain bovine fetal serum (7 %) for five days. Subsequently, the virus purification was done via tangential flow filtration (TFF) system. The quality of purifying viruses was an assessment with titration and SDS-PAGE. Secondly, the virus inactivation was optimized using Minitab software based on three factors, namely time, temperature, and concentration. Afterwards, the inactivity of the samples was tested on mice. Finally, the virus potency was evaluated by the National Institute of Health (NIH) method. RESULTS: The viral titration test in TFF samples revealed that viral titer increased in comparison with the control group (P<0.05). The SDS-PAGE analysis of the purified and concentrated samples showed that the purified virus via TFF had a higher purity compared to the not-concentrated samples. Moreover, the NIH test indicated a 10-fold increase in potency result in the TFF group. CONCLUSIONS: The present study implied that the TFF method is highly suitable for condensation and purification of a high volume of viral fluid and could be applied on an industrial scale to increase the potency of the vaccine produced.