بررسي ريخت شناسي و مولكولي نماتود سودوترونووا كربي در ماهي هامور درياي عمان

Morphological and Molecular Study of Pseudoterranova krabbei Nematoda in Oman Sea Epinephelus Fish

زمينه مطالعه با افزايش رشد جمعيت نياز به مصرف ماهي بيش از گذشته شده است. بسياري از انواع ماهي ميزبان انگل هاي مشترك بين انسان و ماهي هستند. آنيزاكيازيس به عنوان يكي از بيماري هاي مهم مشترك بين انسان و ماهي محسوب مي شود. عامل اين بيماري مرحله نوزادي نماتودهاي خانواده آنيزاكيده از جمله "سودوترونوا و آنيزاكيس" هستند. هدف ماهي هامور كه يكي از ماهيان خوراكي و با ارزش تجاري درياي عمان است، از نظر حضور نماتودهاي خانواده آنيزاكيده مورد مطالعه قرار گرفت. روش كار تعداد 26 نماتود از محوطه شكمي ماهي هامور از تعداد 15 ماهي جداسازي شد. به منظور بررسي ريخت شناسي، هر نمونه كرمي ابتدا با لاكتوفنل شفاف سازي شد. سپس با استفاده از ميكروسكپ نوري مورد مطالعه قرار گرفت. پس از آن استخراجDNA انجام شد. با استفاده از پرايمرهاي مربوط به قسمتي از ژن سيتوكروم اكسيداز زير واحد يك (Cox1) به اندازه bp 710 وارد واكنش PCR شدند. در نهايت قطعه تكثير شده مورد تعيين توالي قرار گرفت. نتايج نوزادها طولي در حدود 1 تا 3 سانتي متر، سفيد رنگ و اغلب پيچ خورده بودند. در انتهاي قدامي انگل تكمه و در برخي از نوزادها خار انتهايي ديده شد و در برخي از نوزادها شكمچه كوچك در انتهاي مري قابل رويت بود. از 26 نمونه نماتود به دست آمده، بعد از بررسي هاي ريختي 8 نمونه آنيزاكيس تشخيص داده شد. اين نمونه ها داراي خار انتهايي و سه لب قدامي بودند. بعد از تعيين توالي، نماتود سودوترونووا از نماتودهاي خانواده آنيزاكيده شناسايي شد. درخت شجره اي كلاد جداگانه پارافايليتيك را براي سودوترونوواي جدا شده نشان داد. نتيجه گيري نهايي بررسي ريخت شناسي نوزادهاي جدا شده را در خانواده آنيزاكيده قرار داد. نتايج مولكولي اين نماتود را سودوترونووا كربي نشان داد. نتايج حاصل از تعيين توالي اين انگل در بانك ژن با شماره MK317965 ثبت شد. اين نماتود براي اولين بار از ماهي هامور درياي عمان جدا شده است.

BACKGROUND: As the population grows, there is further need to food, and fish is not an exception. Several fish species are potential sources of common parasites between humans and fish. One of the important diseases common between human and fish is Anisakiasis. The parasitic agent of this disease is the larval stage of the Anisakid family nematodes, including Pseudoterranova and Anisakis. OBJECTIVES: In this study, Epinephelus fish, one of the edible and commercial valuable fishes of the Oman Sea, was examined for the presence of nematodes of the Anizakidae family. METHODS: Fifteen out of the 26 specimens were infected with Nematodes. Nematodes were isolated from fish abdominal area. For morphological study, each nematode sample was first clarified with lactophenol. Subsequently, it was examined using an optical microscope. After morphological examination of these nematodes, DNA extraction was performed. Using primers related to a part of cytochrome oxidase subunit 1 (Cox1), PCR products were 710 bp for PCR reaction. Finally, the amplified fragment was sequenced. RESULTS: The larvae were about 1 to 3 cm long, white, and often twisted. At the anterior end of the parasite, a button was seen, and in some larvae, a terminal spine was observed. In certain larvae, a small abdomen at the end of the esophagus can be seen. Out of the obtained 26 nematode specimens, eight Anisakis specimens were identified following morphological analysis. These specimens had terminal spines and three anterior lips. After sequencing, Pseudoterranova nematode was identified to belong to aniakidae family. Separate clad tree showed paraphylitic for isolated Pseudoterranova. CONCLUSIONS: Morphological examination categorized isolated larvae as the Anizakidae family. Other molecular results of this nematode showed Pseudoterranova krabbei. The results of sequencing this parasite were recorded in the gene bank under the Accession number: MK317965. This nematode was initially isolated from the Oman Sea Epinephelus fish.