طراحي و ارزيابي عملكرد PCR جهت تشخيص ويروس سندروم لكه سفيد در ميگو

زمينه: ويروس سندروم لكه سفيد، عامل بيماري لكه سفيد در ميگوها و بسياري از سخت‌پوستان مي‌باشد. اين بيماري بسيار مسري است و در طي 310 روز در شرايط كشت طبيعي باعث مرگ‌و مير مي‌شود، بنابراين، تشخيص زود هنگام اين ويروس يك ضرورت مي‌باشد. مواد و روش‌ها: براي 3 ناحيه از ژنوم ويروس و يك ناحيه از ژنوم ميگو پرايمرهايي سازگار با هم طراحي شدند كه بتوانند با هم در يك واكنش عملكرد داشته باشند.استخراج DNA از 40 نمونه ميگوي مشكوك به بيماري انجام گرديد. سپس پرايمرها به صورت تكي جهت تشخيص ويروس لكه سفيد بهينه‌سازي شدند و پس از انتخاب مناسب‌ترين آن‌ها، تشخبص ويروس به صورت همزمان توسط دو جفت پرايمر انجام گرديد. از پرايمرهاي تكثير كننده ژنوم ميگو هم به‌عنوان كنترل داخلي استفاده شد. يافته‌ها: از بين پرايمرهاي طراحي شده 3 جفت پرايمر كه يك قطعه از ژنوم ميگو و 2 قطعه از ژنوم ويروس را تكثير مي‌كردند انتخاب گرديد. از 40 نمونه بررسي شده 28 نمونه مثبت (آلوده به ويروس) و 12 نمونه منفي بود كه با نتايج به‌دست آمده با كيت مرجع مطابقت داشت. نتيجه‌گيري: جهت تشخيص ويروس، بررسي 2 ناحيه از ژنوم آن كافي مي‌باشد و احتمال منفي كاذب را كاهش مي‌دهد. همچنين استفاده از ژنوم ميگو جهت كنترل مراحل استخراج DNA و PCR مفيد مي‌باشد. روش PCR تك مرحله‌اي نسبت به روش‌هاي دو مرحله‌اي (Nested PCR) بدليل كاهش احتمال آلودگي و راحتي انجام آن اولويت دارد.