تاثير مقادير مختلف آنتي اكسيدان 4،2-دي نيتروفنول و لوتئولين بر كيفيت مني خروس طي فرايند انجماد-يخ گشايي

Effect of Different Levels of 2, 4 Dinitrophenol and Luteolin on Semen Quality of Rooster during Freezing-Thawing Process

مقدمه و هدف طي انجماد اسپرم توليد گونه هاي فعال اكسيژن و كاهش فعاليت آنتي اكسيداني، موجب آسيب به ساختار هاي عملكردي اسپرم مي شود. بيشترين تنش به دليل توليد فراوان گونه هاي فعال اكسيژن و عدم نفوذپذيري آنتي اكسيدان ها به داخل ميتوكندري، متوجه اين اندامك مي شود. در اين مطالعه اثرات افزودن 4 سطح تركيبي از آنتي اكسيدان 4،2-دي نيتروفنول كه يك آنتي اكسيدان هدفمند ميتوكندريايي است و لوتيولين كه از قوي ترين تركيبات فلاونوييدي با خاصيت آنتي اكسيداني و ضدميكروبي را دارد، در رقيق كننده ليك بر پايه لسيتين مورد ارزيابي قرار گرفت. مواد و روش ها: بدين منظور نمونه هاي مني از 15 خروس سويه راس با سن 28 هفته به روش مالش پشتي-شكمي جمع آوري شدند. نمونه هاي مني پس از ارزيابي اوليه باهم مخلوط و پس از رقيق سازي و افزودن سطوح مختلفي به ترتيب تيمار 1 (0/5 نانومولار 4،2-دي نيتروفنول + 0/75 ميكرومولار لوتيولين)، تيمار 2 (0/5 نانومولار 4،2-دي نيتروفنول + 1 ميكرومولار لوتيولين)، تيمار 3 (0/75 نانومولار 4،2-دي نيتروفنول + 0/75 ميكرومولار لوتيولين)، تيمار 4 (0/75 نانومولار 4،2-دي نيتروفنول + 1 ميكرومولار لوتيولين) از آنتي اكسيدان ها، نمونه ها ابتدا براي تعادل دمايي در دماي 4 درجه سانتي گراد بمدت 2 ساعت نگهداري شده و پس از لود شدن در پايوت هاي 0/25 ميلي ليتري در فاصله 7 سانتي متري بوسيله بخار ازت منجمد و سپس در داخل ازت مايع غوطه ور شدند. پس از يخ گشايي، نمونه ها از نظر فراسنجه هاي عملكردي و بيوشيميايي اسپرم مورد ارزيابي قرار گرفتند. يافته ها: نتايج پژوهش حاضر نشان دادند كه افزودن تيمار هاي 2 و 3 به رقيق كننده ليك طي انجماد و يخ گشايي اسپرم خروس باعث افزايش معني دار فراسنجه هاي تحرك كل و حركت پيش رونده گرديد و همينطور تيمار 3 سبب افزايش معني دار سرعت اسپرم در خط مستقيم و معيار مستقيم بودن حركت اسپرم نيز شد، تيمار 2 و 3 زنده ماني را نيز بصورت معني داري نسبت به گروه شاهد افزايش داد و سبب كاهش ميزان مالون دي آلدهيد مايع مني و اسپرم هاي با ريخت شناسي غير طبيعي طي انجماد و يخ گشايي شد (0/05>p) همينطور تيمار 3 توانست ميزان يكپارچگي غشا پلاسمايي نسبت به گروه كنترل افزايش بدهد (0/05>p). نتيجه گيري: نتايج مطالعه حاضر نشان مي دهد كه استفاده تركيبي اين دو آنتي اكسيدان سبب هم افزايي خاصيت هر دو آنتي اكسيدان شده و سبب بهبود فراسنجه هاي كيفي و كمي اسپرم خروس طي مرحله انجماد و يخ گشايي شده است.

Introduction and Objective: During sperm freezing, the production of reactive oxygen species and the reduction of antioxidant activity cause damage to sperm. Most of the stress is due to the high production of reactive oxygen species and the impermeability of antioxidants to mitochondria. In this study, the effects of four levels of a combination of 2, 4- dinitrophenol which is a targeted mitochondrial antioxidant and Luteolin antioxidants, which are among the strongest flavonoid compounds with antioxidant and antimicrobial properties, were evaluated in lecithin-based Lake Extender. Material and Methods: For this purpose, semen samples from 15 roosters were collected by dorso-abdominal massage method. Semen samples are mixed together after initial evaluation after diluting and adding different levels, treatment 1 (0.5 nanomolar 2, 4- dinitrophenol + 0.75 micromolar Luteolin), treatment 2 (0.5 nanomolar 2, 4- dinitrophenol + 1 micromolar Luteolin), treatment 3 (0.75 nanomolar 2, 4- dinitrophenol + 0.75 micromolar Luteolin) and treatment 4 (0.75 nanomolar 2, 4- dinitrophenol + 1 micromolar Luteolin), of antioxidants, samples were frozen by nitrogen vapor. After thawing, the samples were evaluated for sperm performance parameters. Results: The results of the present study showed that the addition of treatments 2 and 3 to the leak diluent during freezing and thawing of rooster sperm significantly increased the parameters of total motility and progressive movement and also treatment 3 significantly increased sperm velocity in a straight line and the criterion of direct sperm motility. Also, treatments 2 and 3 significantly increased survival compared to the control group and reduced the amount of semen malondialdehyde and sperm with abnormal morphology during freezing and thawing (p<0.05). Also, treatment 3 was able to increase membrane integrity. Plasma increase compared to the control group (p<0.05). Conclusion: The results of the present study show that the combined use of these two antioxidants has increased the properties of both antioxidants and improved the quality and quantity of sperm.