شناسايي مولكولي خرچنگ گرد (Brachyuran: Oziinae) Epixanthus frontalis از سواحل صخره اي استان بوشهر با استفاده از روش باركدگذاري DNA

Molecular identification of Epixanthus frontalis (Brachyuran: Oziinae) from the rocky shores of Bushehr province using DNA barcode method

گونهfrontalis Epixanthus تنها گونه از جنس Epixanthusدر خليج فارس است كه داراي‌‌ الگوهاي رنگي مختلف مي‌‌باشد. ازآنجايي‌كه وجود گونه‌‌هاي مخفي در ميان سخت‌‌پوستان دريايي بسيار رايج است، هدف مطالعه حاضر شناسايي دقيق و بررسي احتمال گونه‌‌هاي مخفي در ميان نمونه‌‌هاي حاضر است. به همين منظور از 4 الگوي رنگي منسوب به گونه frontalis E. از سواحل صخره‌‌اي استان بوشهر نمونه‌‌برداري انجام شد. سپس اولين گونوپودهاي جنس نر، جداسازي گرديدند و با ميكروسكوپ الكتروني نگاره (SEM) مورد عكس‌‌برداري قرار گرفتند. جهت مطالعات مولكولي، DNA نمونه‌‌ها با استفاده از روش تغيير يافته فنل-كلروفروم استخراج و قطعه ژني زير واحد يك سيتوكروم اكسيداز ميتوكندري (COI) تكثير و توالي‌يابي شد. نتايج مطالعه حاضر نشان داد، توالي نوكلئوتيدي اين قطعه ژني ميتوكندريايي (COI)، در تمام مورفوتايپ‌‌هاي رنگي بر هم منطبق نيستند و اين نتايج در توپولوژي درختان تكاملي براي هر دو آناليز (Maximum likelihood, Bayesian) منعكس شد. مطالعه فراساختار قسمت راسي اولين گونوپود جنس نر نيز نشان داد، تفاوت‌‌هايي اساسي در قسمت راسي اين اندام در برخي مورفوتايپ‌‌هاي رنگي ديده مي‌‌شود. بررسي حاصل نشان داد، با وجود اينكه نمونه‌‌هاي مورد مطالعه از نظر خصوصيات ريخت‌‌شناسي به عنوان يك گونه شناسايي شده‌‌اند، ممكن است متعلق به گونه‌‌هاي جداگانه باشند كه اين فرآيند مستلزم بررسي‌‌هاي بيشتر با ساير نشانگرهاي مولكولي مي‌‌باشد.

Epixanthus frontalis is the only known species of the genus Epixanthus from the Persian Gulf which include color polymorphic specimens. Considering that cryptic species are common among crustaceans, the aim of this study was to identify the cryptic species complexes the collected samples from the Persian Gulf. For this purpose, 4 colorful morphotypes of E. frontalis collected from rocky shores along Bushehr province. Then the first male gonopods was separated and photographed by scanning electron microscopy (SEM). For molecular studies samples of DNA extracted by using phenol-chloroform and mitochondrial cytochrome oxidase subunit gene segment (COI) was PCR and sequenced. The results showed that the nucleotide sequence of this gene fragment of the mitochondrial (COI) is not identical in all colorful morphotypes. These results reflected in the evolution of tree topology for all two analyses (maximum likelihood, bayesian). The study of apical ultrastructure segments of the first male species showed that it can be seen fundamental differences in the apical organs in some colorful morphotypes. Results of this study indicated that although the specimens assigned to single species morphologically, they may belong to different species based on their genotype. Further molecular studies with specific markers are needed for molecular identifications.