توليد ماهي كايمر حاصل از پيوند درون صفاقي سلول‌هاي بنيادي اسپرماتوگوني SSCs ماهي آزاد درياي خزر(Salmo caspius) به لارو‌‌هاي تازه تفريخ شده قزل‌آلاي رنگين كمان

Chimera production by intraperitoneal transplantation of Caspian brown trout (Salmo caspius) spermatogonial stem cells into rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) alevins

ين مطالعه با هدف توليد ماهي كايمر حاصل از پيوند درون صفاقي SSCs ماهي آزاد درياي خزر به لارو‌‌هاي تازه تفريخ شده قزل‌آلاي رنگين كمان اجرا گرديد. سلول‌هاي اسپرماتوگوني از بافت بيضه ماهي آزاد 8 ماهه با روش هضم آنزيمي استخراج شدند. از روش حذف تمايزي براي تخليص سلول‌هاي اسپرماتوگوني استفاده شد. پس از 48 ساعت كشت در محيط L15 حاوي سرم 10%، سلول‌هاي لايه رويي جمع آوري و با رنگ فلورسنت غشايي PKH26 رنگ آميزي شدند. سلول‌ها به حفره صفاقي لارو‌هاي تازه تفريخ شده قزل آلاي رنگين كمان پيوند شدند. لارو‌ها 15 و 30 روز پس از پيوند با استفاده از ميكروسكوپ فلورسنت مورد بررسي قرار گرفتند. 180 روز ماه پس از پيوند گناد ماهيان پيوند شده براي آناليز‌هاي مولكولي استخراج شدند. سلول‌هاي پيوند شده به سمت گناد در حال تكوين قزل آلاي رنگين كمان مهاجرت و كلون زايي كردند. حضور سلول‌هاي ماهي آزاد درياي خزر در 4/41 درصد از گناد ماهيان قزل آلاي رنگين كمان با استفاده از PCR تاييد شد. نتايج اين مطالعه براي اولين بار پيوند موفقيت آميز بين گونه‌اي را در قزل آلاي رنگين كمان نشان داد. اين مطالعه نشان داد كه سلول‌هاي سوماتيك قزل آلاي رنگين كمان قادرند سلول‌هاي اسپرماتوگوني ماهي آزاد درياي خزر را حمايت كنند. پيوند بين گونه‌اي سلول‌هاي اسپرماتوگوني دريچه جديدي را براي حفاظت نژاد‌هاي كمياب و گونه‌هاي در معرض تهديد گشوده است بنابراين پيوند SSCs به عنوان يك روش كاربردي براي حفاظت ذخاير ژنتيكي اين گونه با ارزش قابل پيشنهاد مي باشد.

Spermatogonial stem cells (SSCs) are unique due to their abilities in the transmission of genetic information to the next generation. Thus, they play an important role in the production of interspecies germ line chimeras. The objective of this study was to produce chimera through the intraperitoneal transplantation of Caspian brown trout SSCs into newly-hatched rainbow trout. Spermatogonial cell were isolated from the testes of 8-month-old Caspian brown trout through enzymatic digestion. The cells after isolation and staining with the fluorescent membrane dye PKH26 were intraperitoneally transplanted into triploid rainbow trout hatchlings. At 15 and 30 days after transplantation, the recipients were investigated under a fluorescent microscope. The gonads of recipients were dissected for molecular analysis at 180 days after transplantation. Transplanted spermatogonial cells migrated toward and incorporated into recipient genital ridges. The presence of the Caspian brown trout genetic material was confirmed by PCR in 41.4% of the rainbow trout testes. These results demonstrated for the first time that the interspecies spermatogonial transplantation was successful in rainbow trout. These results revealed that the somatic cells of the rainbow trout gonad can support the colonization and survival of intraperitoneally transplanted cells derived from a fish