بررسي روند تكوين PGC در جنين و لارو ماهي Huso huso

An investigation of primordial germ cell development in embryo and larvae of Huso huso

در ماهيان خاوياري سلول هاي زاياي اوليه از نيمكره گياهي سلول تخم منشاء گرفته و به ستيغ‌ هاي تناسلي در حال نمو مهاجرت ميكنند و در نهايت گامت ها را توليد مي­كنند. در مطالعه حاضر سلول‌هاي زاياي بدوي در لارو ماهي Huso huso ، طي دو مرحله قبل و بعد از جذب كيسه زرده، به روش هضم آنزيمي جداسازي شده و در دو محيط كشت متفاوت DMEM و L15 به مدت سه هفته كشت داده شدند. تعداد و قطر كلوني ها در دو محيط كشت مختلف با يكديگر مقايسه شد. بيان ژنهاي Nanos و Vasa در طي روزهاي مختلف با روش qPCR سنجش شد. براي حفظ ژنوم و نگهداري طولاني مدت سلول‌هاي زايا، انجماد با استفاده از دو محافظ سرمايي DMSO و اتيلن گليكول انجام گرفت. نتايج نشان داد، تعداد و قطر كلوني‌ها در گروه بعد از جذب كيسه زرده در هر دو محيط كشت افزايش مي‌يابد. در حضور DMSO زنده ماني سلول‌ها پس از ذوب نسبت به اتيلن گليكول افزايش قابل ملاحظه‌اي مي‌يابد. با در نظر گرفتن چرخه توليدمثلي طولاني اين ماهيان، با تكثير و شناسايي موفق اين سلول‌ها مي توان در آينده از آن‌ها براي پيوند به داخل گناد گونه‌هاي داراي دوره توليدمثلي كوتاه استفاده كرد.

In sturgeons, Primordial Germ Cells originate from the vegetal pole of the egg. They migrate toward genital ridges during developmental stages and finally differentiate into gametes (the only cells that transmit genetic information). In this study, the cells were isolated from the place of migration of primordial germ cells in Huso huso’s larvae during two stages before and after absorption of the yolk sac by enzymatic digestion. The obtained cell suspensions were cultured for three weeks in L-15 and DMEM medium. The number and diameter of colonies were compared in two culture systems. Expression of Nanos and Vasa genes was measured during different days of culture by qPCR method. To preserve PGCs for a long time, cryopreservation was operated by Dimethyl Sulfoxide and Ethylene glycol. The results showed that the number and diameter of colonies increased in the group after absorbing yolk sac in both L-15 and DMEM medium. The chance of survival for the cells after melting was significantly higher in the presence of DMSO rather than presence of EG. Given the long reproductive cycle and the long time it takes to reach sexual maturity, this method can be used to transplant cultured PGCs into the gonad of species with a short reproductive cycle.