بررسي اثر ريزپوشاني با نانوذرات كيتوزان/آلژينات بر كارايي و ايمني زايي واكسن تزريقي استرپتوكوكوزيس/لاكتوكوكوزيس در ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان (Oncorhynchus mykiss)

Effect of alginate/chitosan nanoencapsulation on immunogenicity and efficacy of Streptococosis/lactococosis vaccine in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

در اين تحقيق اثر ريزپوشاني واكسن تزريقي دوگانه استرپتوكوكوزيس/لاكتوكوكوزيس با ريزذرات آلژينات/ كيتوزان بر ايمني ­زايي در ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان بررسي گرديد. به اين منظور ابتدا باكتري استرپتوكوكوس اينيه و لاكتوكوكوس گارويه در محيط TSB كشت و با فرمالين غير فعال شده، سپس باكتري­ هاي غير فعال‌شده با ريز ذرات آلژينات /كيتوزان ريزپوشاني شدند. 600 قطعه ماهي قزل‌آلاي رنگين‌كمان (1/2± 14گرم) به چهار تيمار، هر تيمار در سه تكرار به ­صورت زير تقسيم گرديدند: تيمار اول با واكسن ريزپوشاني شده، تيمار دوم با واكسن بدون ريزپوشاني و تيمار سوم با آلژينات /كيتوزان بدون باكتري، و به تيمار چهارم نيز PBS استريل تزريق گرديد. ماهي‌ها به مدت دو ماه تغذيه و نگه داري شده و در روزهاي صفر، 20 ،40 و 60 نمونه سرم از ماهي‌ها تهيه و شاخص ­هاي ايمني شامل: عيار آنتي ­بادي سرمي، فعاليت كمپلمان، قدرت باكتري كشي سرم، فعاليت لايزوزيم، ميزان بيگانه ­خواري لكوسيت ها، ميزان پروتئين و ايمونوگلوبولين سرم، و ميزان بيان دو ژن IL-6 و IgM در كليه قدامي ماهي‌ها ارزيابي گرديدند. تيمارها با هر دو باكتري به‌طور جداگانه چالش داده شده و تلفات بين تيمارها مقايسه گرديد. نتايج حاكي از بهبود شاخص ­هاي ايمني در ماهيان واكسينه شده با واكسن ريزپوشاني شده نسبت به ساير تيمارها بود، هم چنين ميزان بيان دو ژن IL-6 و IgM و بازماندگي بعد از چالش باكتريايي نيز در تيمار ريزپوشاني به‌طور معني­ داري بيش ­تر از ساير تيمارها بود. لذا روش ريزپوشاني واكسن با ريزذرات كيتوزان و آلژينات براي بهبود كارايي واكسن دوگانه استرپتوكوكوزيس/لاكتوكوكوزيس در ماهي قزل‌آلا كارايي داشته و قابل استفاده است.

In this study, the effect of injection of streptococcus / lactococcosis vaccine with alginate / chitosan microparticles on immunogenicity in rainbow trout was investigated. For this purpose, first S. iniae and L. garviae were cultured in TSB medium and inactivated with formalin, then the inactivated bacteria were finely coated with alginate / chitosan particles. 600 pieces of rainbow trout (14 ± 2.1 g) divided to four Treatments: Each treatment was divided into three replications as follows: the first treatment with encapsulated vaccine, the second treatment with uncoated vaccine and the third treatment with alginate / chitosan without bacteria, and the fourth treatment was injected with sterile PBS as control. The fish were fed and maintained for two months and on days 0, 20, 40 and 60, serum samples were prepared from the fish and immunity indicators included: serum antibody titer, complement activity, bactericidal, lysozyme activity, Leukocyte phagocytosis, serum protein and immunoglobulin levels, and expression levels of IL-6 and IgM in anterior kidney were evaluated. Treatments with both bacteria were challenged separately and mortality was compared between treatments. The results showed that the immunity indices in fish vaccinated with encapsulated vaccine improved compared to other treatments. Also, the expression of IL-6 and IgM genes and survival after bacterial challenge were significantly higher in encapsulated treatment than other treatments. Therefore, the vaccine microencapsulated method with chitosan and alginate microparticles is effective and can be used to improve the efficiency of streptococcus / lactococcosis vaccine in rainbow trout.