ارزيابي مقايسه اي ايمني‌زايي واكسن كونژوگه پنوموكوك در دو سويه موش آزمايشگاهي BALB/c و DBA/2: مطالعه پيش‌باليني

Comparative evaluation of immunogenicity of pneumococcal conjugate vaccine in two strains of BALB/c and DBA/2 mice: a preclinical study

استرپتوكوك پنومونيه به راحتي از انسان به حيوانات منتقل شده و باعث پنوموني به‌خصوص در اسب مي‌شود. واكسيناسيون گسترده انسان از انتقال اين بيماري به ميزبان اسب جلوگيري مي‌كند. ايمني‌زايي يك واكسن توسط روش‌هاي مختلف ارزيابي مي‌شود. هدف اين مطالعه، طراحي آزموني جهت سنجش ايمني‌زايي واكسن كونژوگه پنوموكوك به‌صورت بخشي از مطالعات پيش‌باليني توليد واكسن است. پس از كشت استرپتوكوك پنومونيه سروتيپ 19F در محيط بلاد آگار، كلوني‌هاي به‌دست آمده با استفاده از رنگ فلورسنس نشاندار شدند. از طرفي سرم موش‌هاي BALB/c و DBA/2 كه با 3 دز واكسن كونژگه پنوموكوك ايمن شده بودند، به منظور تعيين آنتي‌بادي‌هايي با خاصيت بيگانه‌خواري عليه استرپتوكوك پنومونيه جمع‌آوري شد. پس از مجاورت رقت‌هاي سرمي با باكتري نشان‌دار، توانايي بيگانه‌خواري باكتري‌ها توسط اپسونين‌هاي موجود در سرم (اپسونوفاگوسيتوز) با اضافه كردن ماكروفاژ موشي توسط فلوسايتومتري خوانش شد. در هر دو سويه موش با كاهش رقت سرمي درصد سلول­هايي در سرم كه باكتري را فاگوسيتوز كردند كاهش پيدا كرد. تيتر اپسونوفاگوسيتيك در موش BALB/c 128 و در موش DBA/2 64 گزارش گرديد. از طرفي نتايج فلوسايتومتري با نتايج آزمون شمارش دستي كلوني‌هاي زنده تفاوت معني‌داري داشت (r = 0.89, p≤0.001). طبق نتايج مطالعه حاضر مشخص شد سويه موش BALB/c ميزبان بهتري به منظور انجام تعيين كارايي واكسن است. از طرفي استفاده از روش فلوسايتومتري مزاياي بيشتري نسبت به روش سنجش دستي دارد. در نتيجه نتايج اين مطالعه ما را يك قدم ديگر به توليد واكسن موثر نزديك‌تر مي‌كند.

Streptococcus pneumoniae is easily transmitted from humans to animals and causes pneumonia, especially in horses. Extensive human vaccination prevents transmission of the disease to the equine host. The immunogenicity of a vaccine is evaluated by various methods. The aim of this study was to design a test to evaluate the immunogenicity of pneumococcal conjugate vaccine as part of pre-clinical studies of vaccine production. After culturing Streptococcus pneumoniae serotype 19F in blood agar medium, the obtained colonies were labeled using fluorescence dye. On the other hand, the serum of BALB/c and DBA/2 mice immunized with pneumococcal conjugate vaccine was collected to determine antibodies with phagocytosis properties against Streptococcus pneumoniae. After exposure of the serum dilutions with the labeled bacteria, the phagocytic ability of bacteria by serum opsonins (opsonophagocytosis) was read by adding mouse macrophage cells using flow cytometry. In both strains, the percentage of cells in the serum that phagocytosed the bacterium decreased with decreasing serum dilution. Opsonophagocytic titers of 128 and 64 were reported in BALB/c and DBA/2 mice respectively. Contrastingly, the results of flow cytometry were significantly different from that of manual colony count test (r = 0.89, p≤0.001). According to the results of the present study, the BALB/c strain of mice was a better host to determine the efficacy of the vaccine. Also, the use of flow cytometry was more advantageous than manual assay method. As a result, the data obtained from this study brings us a step closer to producing an effective vaccine.