شناسايي داروهاي مكمل گانودرما لوسيدوم به روش PCR با استفاده از ماركرهاي نواحي فاصله ساز داخلي ريبوزومي

Identification of Ganoderma lucidum reishi in herbal supplements by PCR using markers of ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region

سابقه و هدف: قارچ گانودرما لوسيدوم(Ganoderma lucidum) از مهمترين قارجهاي درماني شناخته شده در ايران و جهان مي‌باشد. در اين مطالعه با توجه به عدم وجود دستورالعمل ثابت و مشخص براي كنترل كيفي مكمل هاي قارچي در كشورمان، روشي بر پايه بررسي مولكولي براي استاندارد سازي و كنترل كيفي آن ارائه گرديده است. مواد و روش ها: هشت نمونه از دو برند تجاري مكمل‌هاي قارچ لوسيديوم از داروخانه ها تهيه گرديد. آزمون PCR با استفاده از DNA استخراج شده از كپسول ها انجام پذيرفت. سپس از محصول PCR توالي‌يابي صورت گرفت و نتايج حاصل از توالي يابي با Genbank و پايگاه ژني مورد مقايسه قرار گرفته و درخت فيلوژني مبتني بر ITS آنها با تمامي توالي هاي شناخته شده از ايران رسم گرديد. يافته ها: استخراج DNA از كپسول ها براي تست PCR بهينه گرديدند و محصولات PCR در ژل آگاروز بر اساس اندازه هاي مورد انتظار مشاهده شد. Blast و رسم درخت فيلوژني توالي ها مشخص كرد قارچ موجود در يكي از نمونه هاي تجاري با برچسب آن تطابق كامل داشته و گانودرما لوسيديوم بود و برند ديگر اين تطابق را نشان نداد و به جاي گانودرما لوسيديوم از گانودرما رسيناسيوم (Ganoderma resinaceum) استفاده شده بود. نتيجه گيري: با توجه به تفاوت هاي كمي و كيفي مقادير تركيبات موثر در نمونه هاي مكمل هاي قارچي مختلف موجود در بازار هنگامي كه مواد تشكيل دهنده را نمي توان از نظر مورفولوژيكي يا بيوشيميايي تأييد كرد، بهترين روش موفق و مقرون به صرفه استفاده از روشهاي مولكولي ژنتيكي مبتني بر DNA و تجزيه و تحليل فيلوژنتيك براي احراز هويت گونه‌هاي قارچي هستند.

Aim and Background: Ganoderma lucidum is one of the most important therapeutic mushroom known in Iran and the world. In this study, due to the lack of standard and specific instructions for quality control of mushroom supplements, a molecular method based on Internal Transcribed Spacer (ITS) for detection of mushroom species in supplements has been presented. Material and methods: Eight samples of two commercial brands of G. lucidium mushroom supplements were prepared from pharmacies. PCR test was performed using DNA extracted from capsules. Then, sequencing was performed from PCR product and the results of sequencing were compared with Genbank and their phylogenetic tree was plotted with all known sequences from Iran in Genebank. Results: DNA extraction from the capsules for PCR were optimized and PCR products were observed on agarose gel coordinated to the expected sizes. Blast analysis and phylogenetic tree of the sequences showed that the mushroom in one of the commercial samples was in full accordance with its label which was (G. lucidum) and the other did not show this conformity and was G. resinaceum instead of G. lucidum. Conclusion: Due to the large differences in the quantity and quality of effective compounds in the various mushroom supplements available in the market, if the ingredients cannot be morphologically or biochemically confirmed, the best successful and cast effective method would be molecular method based on mushroom DNA and phylogenetic analysis to specify it species.