بررسي اهميت و خصوصيات مولكولي ويروس موزاييك خيار در گياهان جاليزي منطقه كوار

Evaluation of importance and molecular characterization of Cucumber Mosaic Virus in Cucurbits Fields of Kavar area

ويروس موزاييك خيار (Cucumber Mosaic Virus, CMV) از مهم‌ترين ويروس‌هاي آلوده كننده كدوئيان در ايران و جهان مي‌باشد. به منظور بررسي پراكندگي و اهميت CMV در منطقه كوار در استان فارس، طي بهار و تابستان 1394 ، از مزارع مختلف كدوئيان ( شامل: هندوانه، خربزه و كدو) نمونه برداري شد. در مجموع 85 نمونه گياهي با علائم: موزائيك و زردي برگ‌ها، لكه‌هاي نكروتيك روي رگبرگ‌ها و كوتولگي ، جمع‌آوري شد. بررسي تكميلي نمونه‌ها با كمك آزمون هاي اليزاي ساندويچ دو طرفه آنتي بادي (DAS-ELISA) و واكنش زنجيره اي پلي مراز با نسخه برداري معكوس (RT-PCR)انجام گرديد. در بررسي نمونه‌هاي مشكوك با آزمون DAS-ELISA، تعداد 40 نمونه خربزه، آلوده به ويروس تشخيص داده شدند. به منظور رديابي ويروس با استفاده از آزمون RT-PCR، از جفت آغازگرهاي P1 و P2 كه ژنوم پوشش پروتئيني ويروس را تكثير مي‌كردند، و قطعه‌اي به طول تقريبي 950جفت باز را تشكيل مي دادند، استفاده شد. در 30 مورد از نمونه ها (20 مورد مثبت و 10 مورد منفي) واكنش زنجيره اي پلي مراز انجام و نتايج آزمون اليزا تاييد شد. محصول PCR سه جدايه به طور تصادفي انتخاب و پس از خالص سازي باند مورد نظر، ترادف‌يابي گرديد. براي مقايسه و آناليز فيلوژنتيكي توالي‌هاي به‌دست آمده در اين پژوهش با ساير نقاط دنيا، از 19 توالي ثبت شده در بانك ژن استفاده گرديد. درخت فيلوژنتيكي با كمك نرم‌افزار MEGA6 و به‌روش Neighbor-Joining ترسيم گرديد. توالي ها در دو گروه جداگانه قرار گرفتند كه نمونه هاي ايراني همگي در يك گروه بودند. نتايج اين تحقيق بيانگر آلودگي چشمگير مزارع خربزه به ويروس موزائيك خيار در منطقه كوار و احتمالا خسارت قابل ملاحظه اين ويروس بود.

Cucumber mosaic virus [CMV] is one of the most important viruses infecting cucurbits worldwide. To study CMV infections in cucurbit fields of Kavar region in Fars province, samples were collected from watermelon, melon and squash plants showing symptoms of mosaic, yellowing, necrotic spots and stunting. A total of 85 samples were collected during spring and summer 2014. The infection of samples was examined using DAS-ELISA and RT–PCR. The serological method confirmed the infection of 40 samples with CMV. The coat protein gene of the virus was amplified by RT-PCR, using primers P1 and P2, which confirmed the results of DAS-ELISA. The amplified genes of three isolates were sequenced and compared with 19 corresponding sequences from Genbank. Phylogenetic analysis was performed using MEGA6, by Neighbor-joining method. Sequenced were divided to two separate groups, and all Iranian sequences were placed in group A. The results of this study showed a significant infection with