ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ ﺳﻪ ﺟﺪاﯾﻪ وﯾﺮوس ﻣﻮزاﺋﯿﮏ ﻫﻨﺪواﻧﻪ از ﮐﺪوﺋﯿﺎن اﺳﺘﺎن آذرﺑﺎﯾﺠﺎن ﺷﺮﻗﯽ و ﻏﺮﺑﯽ

Molecular Identification of Three Watermelon Mosaic Virus Isolates from Cucurbits of East Azarbaijan and West Provinence

ويروس موزاييك هندوانه (WMV) متعلق به جنس Potyvirus از خانواده Potyviridae مي باشد. به منظور رديابي، تعيين پراكنش و آناليز فيلوژنتيكي اين ويروس در مزارع مختلف كدوييان استان آذربايجان شرقي و غربي، 305 نمونه گياهي مشكوك به آلودگي، از 13 منطقه جمع آوري شد. در مطالعات گلخانه اي از كدو مسمايي (Cucurbita pepo) به عنوان ميزبان تشخيصي و تكثيري استفاده شد. جدايه هاي WMV دو هفته پس از مايه زني علايم متنوعي شامل بدشكلي، باريك و پاره شدن برگ به همراه تاول هاي برجسته سبز تيره و موزاييك روي برگ گياه (C.pepo) ايجاد نمودند. از گياهان آلوده،  RNAويروس ها مطابق پروتوكل روحاني و همكاران استخراج و cDNA تهيه گرديد. واكنش RT-PCR  روي 54 نمونه كه به عنوان نماينده از بين نمونه ها از لحاظ تنوع علايم و منطقه انتخاب شدند، انجام شد. با استفاده از آغازگر هاي اختصاصي قطعه ي 800 جفت باز از بخش عمده ژن پروتئين پوششي WMV تكثير يافت. محصول PCR سه جدايه WMV برمبناي تنوع علايم و محل نمونه برداري، به طور مستقيم ترادف يابي شدند. ترادف هاي بدست آمده شامل 780  نوكلوتيد از ژن پروتئين پوششي همراه با 22 ترادف انتخاب شده از GenBank همرديف سازي شد. آناليز فيلوژنتيكي براساس ترادف نوكلوتيدي ژن پروتئين پوششي WMV، اين جدايه ها را در 3 گروه قرار داد كه جدايه  T1.Aharو جدايه 32.Tab  استان آذربايجان شرقي در كنار جدايه هايي از اصفهان، يزد، كرمان و تعدادي از كشورهاي اروپايي در گروه I قرار گرفتند. البته جدايه T1.Ahar و 32.Tab در يك زيرخوشه شامل جدايه هاي اروپايي و اصفهاني قرار دارند. جدايه  T5.Nagdاستان آذربايجان غربي در گروه II در كنار جدايه هاي رديابي شده از قسمت هاي مختلف جهان قرار گرفت.

Watermelon mosaic virus (WMV) is member of the genus Potyvirus in the family Potyviridae. To stady determine distribution and phylogenetic analysis this virus in cucurbits various fields of East Azarbaijan and West province, 305 plant samples suspected to be infected were collected from thriteen regions. Inoculation were done on the diagnostic hosts and propagation hosts cucurbita pepo. Two weeks after inoculation, WMV isolates caused various symptoms including leaf deformation, thin and torn with green blistering and mosaic on the leaf of Cucurbita pepo. Viral RNA was extracted from infected plant according to Rouhani et al’s protocol and cDNA was prepared. RT-PCR reaction was performed on 54 samples selected as representative of the samples, in terms of the diversity of symptoms and the region. Using specific primers, 800bp fragment was amplified of coat protein gene area of WMV. PCR products of three WMV isolates was directly sequenced based on the variety of symptoms and the region and was compared containing 780 nt from coat protein gene, along with 19 sequences selected from GenBank. Phylogenetic analysis based on the nucleotide sequence of coat protein gene placed these isolates in three groups where T1.Ahr and 32.Tab isolates of East Azarbaijan were placed next to some isolates from Isfahan, Kerman, Yazd and some European countries into group I. of course, T1.Ahr and 32.Tab isolates and ESF.ES.2 isolates from Isfahan and isolates from Europe were clustered into group I. T5.Nagd isolate of West Azarbaijan and isolates traced from different parts of the world were classified in group II.