جداسازي و تعيين هويت مولكولي مايكوباكتريوم ايويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس از نمونه شير گاوداريهاي استان تهران

Isolation and molecular identification Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis, from milk samples of Tehran province’s dairy Farms

با توجه به شيوع بالاي بيماري يون در گله هاي گاو در سطح كشور و مخاطرات بهداشتي و آسيب هاي اقتصادي ناشي از شيوع اين بيماري؛ به منظور بررسي فراواني مايكوباكتريوم پاراتوبركلوزيس مطالعه‌ اي در گاوداريهاي فعال استان تهران انجام شد. 8000 نمونه سرمي گاو گاوداريهاي اطراف تهران با استفاده از كيت الايزاي موسسه رازي غربالگري شدند. نمونه هاي شير از گاوهاي رآكتور شناسايي شده، براي آزمايشهاي PCR-IS900 مستقيم از نمونه شير و كشت نمونه‌هاي مذكور در محيط هاي كشت خاصMAP (هرولداگ مايكوباكتين دار و بدون مايكوباكتين) براي جستجوي مايكوباكتريوم ايويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس جمع آوري شد. بر روي جدايه هاي حاصل از كشت، آزمايش هاي تاييدي PCR-16srRNA و PCR-IS1311 وPCR-IS900 انجام شد. در نتيجه آزمايش الايزا سرمي 8000 راس گاو، 25دام (3/0 درصد) مثبت تشخيص داده شد. از 25 نمونه شير، 8 مورد (1/0 درصد) درآزمايش مستقيم PCR-IS900 مثبت شدند؛ همچنين تنها نتيجه 3 مورد (04/0 درصد) مورد در جداسازي مايكوباكتريوم ايويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس از طريق كشت و آزمايشات تاييدي PCR ‌، مثبت شد. با توجه به اينكه در مرحله تحت باليني بيماري، انتشار باكتري در شير دام وجود ندارد و شناسايي باكتري از طريق كشت و PCR جواب منفي كاذب مي دهد، لذا براي جلوگيري از ضررهاي اقتصادي در اين مرحله روش الايزا با توجه به حساسيت پايين و ويژگي بالا جهت غربالگري موارد عفوني براي جداسازي دام هاي آلوده از گله مناسب تر مي باشد و از كشت به عنوان روش استاندارد و PCR روشي با حساسيت و ويژگي بالا براي شناسايي دقيق و تاييد گاوهاي دفع كننده پاراتوبركلوزيس مي توان استفاده كرد.

A study was performed in the Persian capital province of Tehran to assess frequency of Para tuberculosis in its operating cattle farms. As many as 8,000 cows were screened by a homemade ELISA system. Milk specimens were collected from detected reactor to perform confirmatory PCR-16srRNA, PCR-IS900 and PCR IS1311 experiments plus bacterial culture on specific media in search for Mycobacterium avium subsp Para tuberculosis (MAP). While among the 25 ELISA positive(0.3%) animals eight cases produced positive results in PCRs(0.1%) only three appeared positive in MAP isolation(0.04%). In deduction, we assume when it comes to selection of control measures against Ptb, in an environment with presumably high prevalence of Ptb like Tehran, ELISA is a much more sensible detection system compared to the zero false-positive method of bacterial culture