بيان و تخليص پروتئين ايمنوژن نوتركيب دربردارنده فاكتورهاي بيماري زاي شيگلا ديسانتري

سابقه و هدف:باكتري شيگلا ديسانتري، از عوامل بيولوژيك بوده كه سبب بروز اسهال خوني مي باشد. با بروز مقاومت آنتي بيوتيكي، طراحي ايمنوژن موثر عليه باكتري ضروري است. فاكتورهاي اتصالي، تهاجم و توكسين باكتري از مهمترين كانديداي واكسن عليه شيگلا ديسانتري مي باشند. بر اين اساس هدف از تحقيق حاضر بيان نوتركيب ايمنوژن كايمر دربردارنده فاكتورهاي ويرولانس شيگلا ديسانتري بود.روش‌ها:بهينه سازي كدوني ژن كايمر با نرم افزار OPTIMIZER انجام گرفت. سازه ژني در وكتور pET32a زير همسانه سازي شد. پلاسيمد نوتركيب به سلول‌هاي E.coli BL21 DE3 منتقل و بيان پروتئين نوتركيب با استفاده از IPTG القا گرديد. پروتئين نوتركيب به روش كروماتوگرافي ميل تركيبي نيكل تخليص و با وسترن بلاتينگ ارزيابي شد.يافته ها:شاخص سازگاري كدون (CAI) مربوط به ژن طبيعي 0.67 بود، درحاليكه ژن بهينه‌سازي شده شاخص 0.9 را دارا شد. آناليز آنزيمي صحت همسانه سازي ژن كايمر در وكتور را تائيد كرد. بيان پروتئين نوتركيب درميزبان E.coli منجر به توليد پروتئين نوتركيب با وزن 80 كيلودالتون شد. وسترن بلات واكنش پروتئين نوتركيب با آنتي‌بادي ضد هيستيدين را نشان داد. ميزان پروتئين خالص شده براي هر ليتر از محيط كشت 2.5 ميلي‌گرم بود. نتيجه گيري:بيان پروتئين نوتركيب كايمر با وزن 80 كيلو دالتون در ميزبان E.coli و تخليص آن با موفقيت انجام شد. پروتئين نوتركيب را مي‌توان به صورت تزريقي و يا بارگذاري شده در نانوذرات به منظور بررسي ايمني‌زائي خوراكي و تزريقي مورد استفاده قرار داد.