بررسي تأثير ال- آرژنين بر القاي كلوني‌زايي سلول‌هاي بنيادي اسپرماتوگوني گوسفند در محيط آزمايشگاه

سابقه و هدف: سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني داراي توانايي خودنوسازي و تمايز بوده و مي توانند صفات ژنتيكي را به نسل بعدي منتقل كنند. بنابراين ايجاد محيط كشت مناسب براي اين رده سلولي مهم است. هدف از مطالعه حاضر بررسي تأثير غلظت هاي مختلف ال- آرژنين بر كلوني زايي سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني گوسفند در محيط آزمايشگاه بود. روش كار: نوع مطالعه حاضر تجربي بود. پنج بار نمونه گيري و تكرار آزمايش انجام شد. سلول هاي اسپرماتوگوني طي دو مرحله هضم آنزيمي از بيضه بره هاي نابالغ جداسازي شدند. سلول ها به مدت 10 روز در شش گروه آزمايشي كشت داده شدند. براي گروه كنترل، كشت ساده سلول هاي اسپرماتوگوني در محيط DMEM حاوي يك درصد آنتي بيوتيك و 5 درصد FBS انجام شد. در گروه هاي تيمار 1، 2، 3، 4 و 5 نيز غلظت هاي مختلف ال- آرژنين (50، 100، 200، 500 و 1000 ميكرومول بر ليتر) به ترتيب به محيط كشت اضافه شد. تعويض محيط هاي كشت هر سه روز يك بار انجام شد. ماهيت سلول ها با رنگ آميزي ايمنوسيتوشيمي عليه آنتي ژن هاي PGP9.5 و PLZF تأييد شد. بلافاصله پس از جداسازي، درصد زنده ماني سلول ها، تعداد و مساحت كلوني هاي تشكيل شده در روزهاي 4، 7 و 10 پس از كشت، توسط ميكروسكوپ معكوس ارزيابي شدند. داده ها توسط آزمون واريانس يك طرفه آناليز شدند. سطح معنا داري 0/05 P در نظر گرفته شد. يافته ها: نتايج نشان دادند كه ميزان زنده ماني سلول هاي اسپرماتوگوني پس از جداسازي 1/4 ± 89/28درصد بود. سلول هاي استخراج شده آنتي ژن هاي PGP9.5 و PLZF را بيان كردند. همچنين در روز 10 پس از كشت و در تيمار 4 (200 ميكرومول بر ليتر ال- آرژنين)؛ تعداد (21/1± 160/8) و مساحت (3/1 ± 4/5) كلوني هاي سلول هاي اسپرماتوگوني افزايش معنا داري در مقايسه با ساير گروه ها داشت (0/05 P). نتيجه گيري: به نظر مي رسد افزودن ال- آرژنين با دوز 200 ميكرومول بر ليتر تاثير مثبتي بر القاي كلوني زايي سلول هاي بنيادي اسپرماتوگوني دارد و مي تواند محيط كشت مناسبي را در محيط آزمايشگاه فراهم كند.