تشخيص سريع كوي هرپس ويروس (CyHV-3) به روش تكثير همدما به واسطه حلقه (LAMP) و مقايسه با PCR

هرپس ويروس نوع 3 كپورماهيان (CyHV-3) يا كوي هرپس ويروس (KHV)، يك ويروس نوظهور به شدت مسري و با حدت بالا است كه سبب ايجاد تلفات سنگين و ناگهاني در ماهي كپور معمولي و كوي و هيبريدهاي آنها مي شود. روش LAMP يك تكنيك مولكولي مبتني بر تكثير بسيار اختصاصي اسيد نوكلئيك اجرام پاتوژن در شرايط همدما و بدون نياز به تجهيزات گران قيمت مي باشد كه در سال‌هاي اخير به منظور تشخيص پاتوژن‌هاي انسان و حيوانات توسعه يافته است. با توجه به اهميت تشخيص سريع بيماري كوي هرپس ويروس در مزارع مشكوك به آلودگي و پايش دايمي مزارع پرورش كپورماهيان كشور، اين مطالعه با هدف ارزيابي روش تلفيقي LAMP با پروب‌هاي نانوطلا در تشخيص سريع اين ويروس صورت گرفت. در اين مطالعه با استفاده از 6 آغازگر اختصاصي، بخشي از ژن تيميدين كيناز (TK) كوي هرپس ويروس با روش بهينه شده LAMP، تكثير و براي تشخيص رقت‌هاي مختلف DNA ژنوميك و DNA در نمونه هاي بافتي كپور معمولي، آزمايش اختصاصيت و حساسيت مورد بررسي قرار گرفت و آزمايش سرعت و حساسيت نسبت به روش PCR معمولي نيز مقايسه گرديد. نتايج بيانگر اختصاصي بودن صد درصدي و حساسيت تشخيص بر اساس رقت استوك 8-^10 معادل 1/25 فمتوگرم در ميكروليتر براي DNA ژنوميك ويروس و 7 -^10 معادل 8/2 فمتوگرم در ميكروليتر براي DNA ويروسي آميخته شده در نمونه بافتي بود. همچنين بر اساس نتايج حاصله، روش LAMP پيشنهادي در مقايسه با PCR معمولي سه برابر سريعتر و 8000 برابر دقيق‌تر بود. با توجه به كارايي بالا، روش LAMP مي تواند به عنوان يك ابزار قدرتمند و دقيق و سريع جهت شناسايي مولكولي كوي هرپس ويروس در آزمايشگاه‌هاي تشخيصي با تجهيزات اندك مورد استفاده قرار گيرد.