ساخت سازه ژني pCDNA3.1-AopB به عنوان مدل واكسن DNA عليه Aeromonas hydrophila در كپورماهيان

باكتري Aeromonas hydrophila يكي از مهم‌ترين باكتري هاي بيماري‌زاي ماهي است كه سبب سپتي‌سمي هموراژيك، آب آوردگي محوطه شكمي و مرگ و مير در سنين متفاوت و در گونه هاي مختلف ماهي به ويژه كپورماهيان مي شود. ايمن‌سازي يكي از روش هاي مناسب براي پيشگيري از اين بيماري است. استفاده از سازه‌هاي ژني حاوي آنتي‌ژن‌هاي اختصاصي باكتري‌ها در سال هاي اخير به منظور توسعه واكسن‌هايي با كارايي بالا و استفاده در روش‌هاي آسان‌تر مانند تجويز خوراكي در آبزي‌پروري توسعه يافته است. در مطالعه حاضر، پروتئين aopB سيستم ترشحي تيپ III باكتري A. hydrophila جدا شده از كپورماهيان استان خوزستان به منظور طراحي يك سازه ژني مدل واكسن DNA در پلاسميد يوكاريوتي بياني pCDNA3.1 همسانه‌سازي شد. در اين پژوهش از جدايه باكتري A. hydrophila كه از ماهيان كپور مبتلا به سپتي سمي آئروموناسي در مزارع پرورشي استان خوزستان جداسازي و با روش مولكولي و فنوتيپي تاييد شده بودند، استفاده شد. توالي ژن aopB از بانك ژن NCBI استخراج و ناحيه كد كننده ژن با استفاده از آغازگرهاي حاوي نواحي برش آنزيم هاي EcoRI و NheI تكثير شد. سپس محصول PCR در پلاسميد بياني يوكاريوتي pCDNA3.1-HisA الحاق و با استفاده از شوك حرارتي به باكتري TOP10-F انتقال داده شد. پس از غربالگري كلون هاي مثبت با استفاده از كلوني PCR و تعيين توالي، سازه ژني pCDNA3.1-AopB با استفاده از روش الكتروپوراسيون به سلول هاي CHO منتقل و بيان پروتئين نوتركيب با استفاده از روش وسترن بلات در ليز سلولي ارزيابي شد. نتايج PCR و تعيين توالي سازه ژني نشان دهنده همسانه‌سازي ژن aopB به طول تقريبي 1000 جفت باز در پلاسميد pCDNA3.1-HisA بود. آزمون وسترن بلات با استفاده از آنتي‌بادي ضد HisTag وجود يك پروتئين با وزن مولكولي حدود 36 كيلودالتون را نشان داد. در مجموع، سازه ژني pCDNA3.1-AopB حاوي ژن aopB طراحي و مورد تاييد قرار گرفت. از اين سازه ژني مي‌توان در مطالعات باليني به منظور بررسي ايمني‌زايي در كپورماهيان در بيماري‌زايي تجربي با A. hydrophila استفاده كرد.