مطالعه ويژگي هاي فنوتيپي، ژنوتيپي و دامنه ميزباني استرين هاي Pseudomonas savastanoi، عامل گال زيتون و خرزهره

براي مطالعه خصوصيات فنوتيپي، مولكولي، بيماري‌زايي و فيلوژنتيكي عوامل باكتريايي گال‌هاي زيتون و خرزهره، نمونه‌هايي از برگ، دمبرگ، شاخه و تنه اين درختان كه داراي علائم گره يا گال بودند، از شهرستان‎هاي مختلف استان‎هاي مازندران، گيلان، قزوين و تهران جمع‌آوري و به آزمايشگاه منتقل شد. از محيط‌كشت Kings’B براي جداسازي استفاده شد و ۱۸۰ استرين از گال هاي خرزهره و 15 استرين از گال هاي زيتون خالص سازي شدند. آزمون بيماري زايي استرين هاي جداشده از گال زيتون و گال خرزهره نشان داد. 14 استرين جد اشده از زيتون و 18 استرين جد اشده از خرزهره روي ميزبان اصلي خود بيماري زا بودند. به علاوه استرين هاي خرزهره روي شاخه هاي جوان زيتون نيز بيماري زا هستند، در صورتي كه استرين هاي زيتون روي خرزهره بيماري زا نبودند. تمامي استرين ها گرم منفي، كاتالاز مثبت و هوازي اجباري بودند و توانايي توليد رنگدانه فلورسنت را روي محيط كشت King’s B داشتند. در آزمون‌هاي LOPAT، توليد لوان، آنزيم اكسيداز، آنزيم آرژنين‌دي‌هيدرولاز و پوسيدگي سيب‌زميني، منفي و در آزمون فوق‌حساسيت در توتون و شمعداني مثبت بودند. واكنش پي سي آر با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي عوامل گال زيتون (PsvF/PsvR) و خرزهره (PsnF/PsnR)روي استرين هاي داراي توانايي ايجاد فوق حساسيت در توتون انجام شد و به ترتيب در 14 استرين از نمونه هاي گال زيتون و 18 استرين از نمونه هاي گال خرزهره قطعه مورد نظر به اندازه ۳۸۸ و ۳۴۹ جفت باز تكثير شد. استرين ها براساس ويژگي‌هاي فنوتيپي، بيماري‎زايي و استفاده از آغازگرهاي اختصاصي به‎ترتيب، Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi و P. savastanoi pv. nerii شناسايي شدند. براي تعيين دقيق جايگاه تاكسونوميكي استرين ها از روش تجزيه و تحليل توالي چند ژنگاهي (MLSA) با تكثير و توالي‌يابي قطعه‎ اي از سه ژن خانه‌دار rpoB، rpoD و gyrB استفاده شد. درخت‎ فيلوژني براساس بيشينه تشابه (Maximum likelihood) توالي سلسه اي با 1000 تكرار (bootstrap) ترسيم شد استرين هاي مورد مطالعه بدون تمايز و تفكيك در يك گروه در كنار استرين هاي پاتوتيپ قرار گرفتند. هرچند درخت هاي فيلوژني مبتني بر توالي ژن هاي gyrB و rpoB نتوانست استرين‎ هاي Psv و Psn را از هم تفكيك كند، البته درخت فيلوژني رسم‎ شده بر اساس ژن rpoD استرين‎هاي Psv و Psn را از هم تفكيك كرد.