كلون سازي و بيان پروتين نوتركيب UreB-Omp18 در سويه ي ايراني هليكوباكتر پيلوري

سابقه و هدف: هليكوباكتر پيلوري عامل عفونتهاي مزمن گوارشي شناخته شده است. درميان روشهاي تشخيصي، تست سرولوژيك يك روش دردسترس با حساسيت قابل قبول است. اما اختصاصيت پايين، كاربرد آن را محدود ميكند. هدف از اين مطالعه طراحي، كلونسازي و بيان پروتين نوتركيب حاصل از دو ژنureB  وomp18 از سويه بومي ايراني ميباشد كه ميتواند به‌عنوان يك الگو در طراحي كيت سرولوژيك با اختصاصيت بالا به منظور تشخيص عفونت هليكوباكتر پيلوري به كار رود.مواد و روشها: پس از استخراج DNA ژنومي هليكوباكتر پيلوري، ژنهاي ureB وomp18 با واكنش PCR تكثير شده و بعد از برش آنزيمي در وكتور بياني pET-22b كلون گرديد. بيان پروتين نوتركيب حاصله با كمك IPTG القا و با خلوص بالا با كروماتوگرافي ميل-تركيبي (Affinity Chromatography) تخليص شد. خاصيت آنتيژني پروتين نوتركيب تخليص شده با روش وسترن بلاتينگ تاييد گرديد.يافته ها: دو قطعهي ژني ureB وomp18 به ترتيب با سايزهاي 597 و 479 جفت باز توسط PCR تكثير يافته و به شكل يك قطعهي هيبريد در وكتور pET-22b كلون گرديد. بيان پروتين نوتركيب حاصل در باكتري E. coli BL21(DE3) به شكل يك قطعهي حدود 60 كيلودالتوني در SDS-PAGE ظاهر گرديده و توسط ستون Ni-NTA تخليص شد. نتايج وسترن بلات آنتيژن كايمريك تخليص شده با سرم بيماران مبتلا نشان دهنده ويژگي آنتيژنيِ اين پروتين نوتركيب بود.نتيجهگيري: در مطالعهي حاضر براي اولين بار پروتين نوتركيب UreB- Omp18 از سويه بومي اين باكتري توليد گرديد كه مي‌تواند گزينه مناسبي براي طراحي كيت تشخيصي در منطقه باشد.