بررسي الگوهاي بيان High temperature requirement A2 (HtrA2) در رده‌ها و بافت‌هاي سلولي مختلف و توليد آن در ميزبان پروكاريوتي

HtrA2 سرين پروتئاز ميتوكندريايي است كه تقريبا در همه بافتها بيان ميشود و تحت شرايط استرسي اين پروتئاز به يك فاكتور پروآپوپتوزي تبديل ميشود و در القاي آپوپتوز شركت ميكند. اين پروتئين احتمالا داراي فعاليت چاپروني نيز بوده و در تاخوردن مناسب پروتئين‌ها نقش دارد. باتوجه به اهميت آنزيم HtrA2 در القاي آپوپتوز و ارتباط آن با برخي بيماري‌ها، الگوي بيان پروتئين HtrA2 در رده‌هاي سلولي طبيعي و برخي رده هاي بيماري بررسي شد. نتايج PCR نشان داد كه ژن HtrA2 در سلول‌هاي طبيعي معده بيان مي شود ولي در سلول‌هاي سرطاني معده بيان نمي شود. هم چنين در سلول‌هاي سرطاني ريه و سلولهاي آدنوكارسينوماي كولون انسان (رده سلولي SW480) نيز بيان ديده شد. با توجه به بيان متفاوت ژن HtrA2 در رده هاي سلولي هاي طبيعي و بيماري، الگوي مشخصي كه نشان دهنده ارتباط بيان اين پروتئاز با بيماري باشد مشاهده نگرديد. در مرحله بعد با توجه به اهميت HtrA2 ، قطعه cDNA مربوط به آنزيم HtrA2 درون وكتورpET21a(+) كلون و وكتور نوتركيب به سلول‌هاي مستعد E.coli سويه TOP10 منتقل شدند. در نهايت بيان پروتئين توسط SDS-PAGE آناليز شد. سپس پروتئين توليد شده توسط ستون نيكل-آگارز خالص‌سازي شد و فعاليت پروتئازي آن توسط سوبستراي كازئين و با روش اسپكتروفتومتري سنجيده شد. نتايج نشان داد كه آنزيم توليد شده فعال است و بنابراين HtrA2 توليد شده ساختار طبيعي داشته و مي توان از آن در جهت تحقيقات بعدي استفاده نمود.