طراحي و ساخت سازه ژني ايمنوتوكسين ضد EGFR VIII متصل به اگزوتوكسين A سودوموناس ائروجنوزا براي سرطان گليوبلاستوما

مقدمه: سرطان از رايج ترين علل مرگ و مير انساني در جوامع امروزي است كه تلاش‌هاي بسيار گسترده‌اي براي مقابله با آن در حال انجام است. ايمونوتوكسين‌هاي مبتني بر ANTI-EGFRVIII مي‌توانند با هدايت بخش‌هاي توكسيني به سلول‌هاي سرطاني كه بيان بيش از حد گيرنده EGFRVIII دارند منجر به مرگ سلولي آنها شوند.مطالعه حاضر توسعه يك ايمونوتوكسين انساني جديد ضد EGFRVIII EGFRVIII) (huscFv-PE38با ادغام ژنتيكي آنتي بادي تك زنجيره اي ضد EGFRviii انساني با اگزوتوكسين A كوتاه شده سودوموناس آئروژينوزا (PE) (PE38KDEL) است.روش كار: قطعه PE-38 اگزوتوكسين A با استفاده از PCR تكثير و به pET22b-antiEGFRVIII huscFv متصل شد. واكنش با روش PCR وهضم آنزيمي تاييد شد. ايمونوتوكسين حاصل در E. coli BL21 (plysS) بيان شد و سپس توسط ستون كروماتوگرافي Ni-NTA تخليص شد. پس از آن، واكنش ايمونوتوكسين تخليص شده با روش‌هاي الايزا و MTT مورد ارزيابي قرار گرفت.يافته‌ها: آزمايش‌هاي PCRو هضم آنزيمي، صحت و يكپارچگي ساختار ايمونوتوكسين طراحي شده را تأييد كردند. تخليص ايمونوتوكسين بيان شده توسط ستون كروماتوگرافي نيكل منجر به ساخت يك ايمونوتوكسين نوتركيب بسيار خالص گرديد كه وزن مولكولي ۶۳ كيلو دالتون را در ژل SDS-PAGE نشان داد.نتيجه‌گيري: نتايج  مطالعه حاضر نشان داد كه ايمونوتوكسين طراحي شده مي‌تواند به عنوان يك كانديد اميدواركننده براي مهار سول هاي سرطاني EGFRviii مثبت در نظر گرفته شود.