بيان هترولوگ ژن پروتئين پوششي ويروس موزائيك گل‌كلم در E. coli و تشكيل ذرات شبه ويروسي

ويروس موزائيك گل‌كلم  (Cauliflower Mosaic Virus= CaMV)نخستين ويروس گياهي شناسايي شده داراي ژنوم DNA است كه خسارت اقتصادي زيادي به گياهان خانواده Brassicaceae وارد مي كند. توليد موفق كپسيد هاي اين ويروس هم در تشخيص سرولوژيكي آن و هم در تشكيل ذرات شبه ويروسي Virus-Like Particles = VLPs مفيد است. در اين تحقيق، DNA نمونه هاي گل كلم داراي علايم مشكوك به ويروس، استخراج و ژن پروتئين پوششي (Coat protein= CP) ويروس توسط آغازگرهاي اختصاصي در PCR تكثير شد. سپس توسط آنزيم هاي برشي BamHI و SmaI در وكتور بياني  pGEX2TKدر پايين دست GST وارد و بعد از تاييد وكتور نوتركيب، توالي يابي انجام شد و توالي بدست آمده در پايگاه داده NCBI با برنامه BLASTn با توالي هاي موجود در بانك ژن مقايسه شد و مشخص گرديد كه اين توالي مربوط به ويروس CaMV با شماره دسترسي KF357590.1 در پايگاه NCBI است. بيان پروتئين CP در باكتري E. coli سويه Rosetta القاء و بهينه سازي شد. بيان بسيار بالاي اين پروتئين در دماي 37 درجه سانتي گراد و شش ساعت پس از القا به كمك IPTG با غلظت نهايي 1mM بدست آمد. سپس اين پروتئين با نانوذرات سفاروز كه توانايي اتصال به GST را دارند خالص سازي و در SDS-PAGE مشاهده شد. پروتئين هاي خالص شده CP با ميكروسكوپ الكتروني بررسي شد و ذرات شبه ويروسي (VLPs) مشاهده گرديد. تصاوير مربوط به ميكروسكوپ الكتروني توليد VLPs اين ويروس را بدون ايجاد اينكلوژن بادي و با مونتاژ صحيح تائيد مي كند كه مي تواند در حمل دارو در پزشكي مورد آزمايش قرار گيرد.