بررسي تأثير بيش‌بيان كلاستر miR-302/367 بر بيان ژن‌هاي مسير پيام‌رسان mTOR در سلول‌هاي بنيادي بافت چربي انساني

سابقه و هدف: كلاستر miR-302/367 نقش مهمي در بازبرنامه‌ريزي سلول‌هاي سوماتيك به سلول‌هاي بنيادي پرتوان و حفظ پرتواني ايفا مي‌كند. تا به حال، مطالعه‌هاي متعددي در زمينه مكانيسم عمل كلاستر miR-302/367 در بازبرنامه‌ريزي انجام شده، اما يافته چنداني درباره تأثير اختصاصي اين كلاستر بر مسير پيام‌رسان mTOR وجود ندارد. مسير mTOR علاوه بر كنترل روندهاي سلولي مختلف، نظير تكثير، تمايز و اتوفاژي، نقش مهمي را در فرآيند بازبرنامه‌ريزي بر‌عهده دارد. بر اين اساس، مطالعه حاضر با هدف شناسايي تأثير كلاستر miR-302/367 روي مسير mTOR در سلول‌هاي بنيادي بافت چربي طراحي شد.روش كار: در اين مطالعه تجربي، سلول‌هاي بنيادي بافت چربي در مرحله پاساژ سوم تا پنجم با استفاده از كيت و سيستم ترنسفكشن نئون با وكتور TDH101PA-GP بيان‌كننده كلاستر mir-302/367 و وكتور Mock ترنسفكت شدند. يك هفته پس از ترنسفكشن، بيان برخي از ژن‌هاي مسير پيام‌رسان mTOR در سلول‌هاي بنيادي بافت چربي با روش Real-Time PCR  مقايسه‌اي بررسي شد. نسبت بيان ژن‌ها در گروه‌هاي miR-302/367 و Mock (4 تكرار) با استفاده از نرم‌افزار REST 2009 و آزمون Pair Wise Fixed Reallocation Randomization Test بين دو گروه مقايسه شد. همچنين، بيان برخي از پروتئين‌هاي مسير mTOR با روش وسترن بلات ارزيابي شد.يافته‌ها: بيش‌بيان كلاستر miR-302/367 سبب كاهش معنا‌دار در بيان ژن‌هاي AKT، MTOR، RAPTOR و RICTOR شد، به طوري كه بيان اين ژن‌ها در گروه miR-302/367 نسبت به گروه Mock به ترتيب به 0/44، 0/51، 0/56 و 0/6 كاهش يافت (P 0.05). بيان ژن‌ها در گروه Mock يك در نظر گرفته شد. همچنين، طبق بررسي وسترن بلات بيان پروتئين‌هاي AKT فسفريله و MTOR فسفريله در سلول‌هاي بنيادي بافت چربي ترنسفكت شده با كلاستر miR-302/367  كمتر از گروه Mock بود. نتيجه‌گيري: به نظر مي‌رسد كه بيش بيان خوشه miR-302/367 مي‌تواند فعاليت مسير پيام‌رسان mTOR را در سلول‌هاي بنيادي بافت چربي مهار ‌كند و با اين مكانيسم بازبرنامه‌ريزي سلول‌ها را تحت تأثير قرار دهد.