ساخت وكتور دوسيستروني مبتني بر دومين فيوژن IntF2A براي بيان همزمان زنجيره‌هاي پلي‌پپتيدي آنتي‌بادي بواسيزوماب و بررسي تظاهر موقت آن در گياه توتون

هدف: بواسيزوماب (با نام تجاري آوستين) يك آنتي‌بادي مونوكلونال (mAb) انساني شده است كه به‌طور گسترده‌اي در درمان سرطان‌هاي مختلفي كاربرد دارد. اين دارو جزء گرانقيمت‌ترين و پرفروش‌ترين داروهاي دنيا است. بواسيزوماب از طريق تكنولوژي DNA نوتركيب در سيستم بيان پستانداري، تخمدان همستر چيني توليد مي‌شود. در سال‌هاي اخير، سيستم‌هاي بيان گياهي به دليل مزاياي مختلف براي توليد پروتئين‌هاي نوتركيب دارويي، توجه جهاني را به خود جلب كرده‌اند. توليد موفقيت‌آميز mAbها به تاشدگي و گردايش مناسب زنجيره سبك (HC) و زنجيره سنگين (LC) بستگي دارد. بيان همزمان كارآمد و كنترل شده اين زنجيره‌هاي پپتيدي يك ملاحظه مهم در طراحي وكتورهاي بيان آنتي‌بادي است. هدف اين تحقيق ساخت وكتور دو‌سيستروني براي بيان همزمان زنجيره‌هاي پپتيدي HC و LC آنتي‌بادي بواسيزوماب با استفاده از دومين فيوژنIntF2A و ارزيابي آن از طريق بيان موقت در گياه توتون است.مواد و روش‌ها: به منظور ساخت وكتور نوتركيب، توالي ژن‌هاي رمزكننده بواسيزوماب و IntF2A از نظر كدوني بهينه‌سازي شد و براي بيان در گياه توتون به‌طور مصنوعي سنتز شدند. وكتور نوتركيب دوسيستروني بواسطه IntF2A با روش معمول هضم آنزيمي اتصال ساخته شد. در نهايت، سازه نوتركيب براي بيان گذرا بواسيزوماب در گياهان توتون از طريق روش آگروفيلتراسيون استفاده گرديد. براي تعيين حضور رونوشت‌ تراژن‌ها از آناليز RT PCR استفاده شد. توليد و ميزان تجمع آنتي‌بادي نوتركيب از طريق آناليز وسترن بلات مورد ارزيابي قرار گرفت.نتايج: ساختار مولكولي وكتور نوتركيب ساخته شده از طريق آناليز‌هاي PCR، هضم آنزيمي و توالي‌يابي تاييد شد. آناليز RT PCR نشان داد تراژن‌ها به‌صورت يك رونوشت واحد بيان مي‌شوند. آناليز وسترن بلات توليد آنتي‌بادي هتروتترامر كامل در برگ‌هاي آگرواينفيلتر شده را تاييد نمود. سطح تجمع آنتي‌بادي به طور متوسط 67.20 ميلي‌‌گرم بواسيزوماب به ازاي هر كيلوگرم وزن تر (معادل 3.36 درصد پروتئين محلول كل) برآورد شد. نتيجه‌گيري: نتايج نشان داد وكتور دو‌سيستروني مبتني بر IntF2A بيان همزمان كارآمد ژن‌هاي رمزكنندة زنجيره‌هاي پپتيدي آنتي‌بادي و تجمع بالاي mAb با فرم كامل را در سلول‌هاي گياهي فراهم مي‌كند. از وكتور ساخته شده مي‌توان براي امكان توسعه و ساخت آنتي‌بادي بواسيزوماب در سيستم بيان گياهي استفاده كرد.