تشخيص هيستيدين اساسي در عمل كاتاليتيكي آنزيم فسفاتيدات فسفوهيدرولاز غشايي كبد موش صحرايي نر

سابقه و هدف: آنزيم فسفاتيدات فسفوهيدرولاز (PAP) باعث تبديل اسيد فسفاتيديك به دي آسيل گليسرول و فسفات معدني (Pi) مي شود. دو فرم مختلف از آنزيم PAP در سلولهاي كبدي موش صحرايي گزارش شده است، يكي PAP1 كه در متابوليسم فسفوليپيدها و گليسروليپيدها و ديگري PAP2كه در پديده Signal transduction نقش دارد. PAP2 در موش صحرايي داراي دو ايزوفرم PAP2a و PAP2b مي باشد. در اين مطالعه وجود هيستيدين اساسي در آنزيم PAP2b مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از n- اكتيل گلوكوزيد، غشاي سلول هاي كبدي موش صحرايي حل گرديد و PAP2b طي چندين مرحله ي كروماتوگرافي تخليص گرديد. ثابت هاي كينتيكي بــر اساس مدل كينتيك رقت سطحي تعيين گرديدند. جهت تعيين خلوص، تعداد و وزن زيرواحدهاي آنزيمي از روش الكتروفورز ناپيوسته در حضور SDS با ژل پلي اكريل آميد 10 درصد استفاده گرديد. تعداد مول هيستيدين موجود در يك مول آنزيم با استفاده از مشتق –N كربتوكسي هيستيدين محاسبه شد. نتايج: PAP2b تخليص شده فعاليت ويژه اي معادل mU/mg protein7350 داشت. الكتروفورز PAP2b تخليص شده در حضور SDS يك نوار با وزن مولكولي 8/33 كيلودالتون نشان داد. مطالعات غيرفعال سازي آنزيم به وسيله معرف دي اتيل پيرو كربنات شواهدي بر ضرورت وجود هيستيدين اساسي براي فعاليت آنزيم مهيا كرد. تعداد مول هيستيدين تعديل شده به ازاي هر مول آنزيم 6 عدد بود. نتيجه گيري: مهار آنزيم توسط دي اتيل پيرو كربنات نسبت به اسيد فسفاتيديك رقابتي بود و نشان از حضور هيستيدين در مكان فعال آنزيم داشت. احتمالا واكنش كاتاليتيكي PAP2b نيز مي بايستي همانند ساير اعضاي خانواده اش از طريق تشكيل واسطه ي فسفوهيستيدني انجام گيرد.